UDG酶和UNG酶
更新时间:2024-04-29 07:49:01 阅读量: 综合文库 文档下载
UDG酶,即Uracil - DNA Glycocasylase,尿嘧啶-DNA糖基化酶。 UDG酶简介
碱基对,是形成DNA、RNA单体以及编码遗传信息的化学结构。如果有某一对碱基对的排列错误而导致基因编码异常,就很有可能引发癌症等疾病。可是,很多动物的DNA分子链中有数以亿计的碱基对,想从中找到错误的一条就无异于大海捞针。但美国的研究人员发现,有一种细胞酶可自动检验碱基对排列的对错。这就是UDG酶。美国约翰斯·霍普金斯大学医学院的研究人员报告说,他们通过实验发现,动物细胞中的一种UDG酶可以抓取DNA分子链中的基对并用特定形状的“口袋”来进行检查,如果碱基对排列形状正确则将其放回原处,如果形状有误则将其清除,DNA分子链中留下的空白会由其他修复机制来修补。 uracil-N-glycosylase
尿嘧啶-N- 糖基化酶(UNG)酶
原理:UNG酶的作用原理是选择性水解断裂含有dU的双链或单链DNA中的尿嘧啶糖苷键,形成的有缺失碱基的DNA链,在碱性介质以及高温下会进一步水解断裂,从而被消除.UNG酶的最佳活性温度为50℃,95℃灭活。
作用:为保证PCR结果的准确性,要预防非特异性PCR扩增和污染。常用的措施是使用UNG酶(Uracil-N-Glycosylase)和Taq酶热启动。PCR反应最常见, 最重要的污染物是PCR产物,防污染热启动PCR试剂盒以dUTP取代dTTP,所以PCR产物都是含有dU的DNA链。在PCR开始前增加50℃的保温步骤,UNG酶即可将反应体系中已有的U-DNA污染物中的尿嘧啶硷基降解,并在随后变性这步的条件下DNA链断裂,消除由于污染DNA产生的扩增,从而保证扩增结果的特异性,准确性。同时UNG酶被灭活,不会再降解新扩增的产物U-DNA。 高品质的UNG酶可以消除高达108的U-DNA产物,和热启动Taq酶一同用于建立含有UNG/dUTP防污染体系的热启动PCR反应系统。
其实两者是一个东西。见罗氏专利原文“Uracil-DNA glycosylase,also known as uracil N-glycosylase or UNG,has significant ablity to regain activity following heat denaturation。” 关于UNG酶的专利,
US5035996 UDG酶防止PCR产物污染 Hartley,Life Technologeis 2009过期
US5418149 UDG酶用于减少非特异扩增及UDG酶表达制备Gelfand,Hoffmann-La Roche 2012过期。 其实是罗氏把UNG酶的功能更详细描述了下,并添加了一些制备的方法。不过现在也要到期了。
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