猪精液质量评价方法的相关性研究

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2 0 2. -——静，武彩红，张

江苏农业科学

2 0 1 3年第 4 1卷第 4期

姚

斌，等.猪精液质量评价方法的相关性研究[ J] .江苏农业科学， 2 0 1 3, 4 1 ( 4 ): 2 0 2— 2 0 6

猪精液质量评价方法的相关性研究姚静，武彩红，张斌，傅海科，杨芝芬，李恺，申强( 1 .江苏省无锡市农业科技推广中心，江苏无锡 2 1 4 0 2 3; 2 .江苏畜牧兽医职业技术学院，江苏泰州 2 2 5 3 0 0; 3 .江苏姜曲海种猪场，江苏泰州 2 2 5 3 0 0 )

摘要：为了探索猪精液质量评价方法的相关性，对猪精子分别进行活力、 P I染色、低渗肿胀试验、 R h 1 2 3染色、 F I T C—P N A染色检查，统计其与体外受精的相关性。结果显示，各指标间存在较强的线性相关性，以顶体完整率与体外受精率的相关程度最高。说明顶体完整率在预测体外受精率方面更优于其他指标。关键词：猪；精液；评价方法；相关性中图分类号：￥ 8 2 8 . 3 4 文献标志码：A 文章编号： 1 0 0 2— 1 3 0 2 ( 2 0 1 3 ) 0 4— 0 2 0 2- 0 3

动物精子质量直接关系到精子的受精能力与受胎率，是

1 . 2

活力评价方法

体外受精和人工授精技术成功的关键，因此如何准确、客观地评价精子质量一直是被关注的问题。目前，猪精液品质检查主要包括精子活力、畸形率及存活时间等指标，存在费时、主观性强、可重复差等问题，且检测方法和指标不能反映精子内部结构和功能。随着辅助生物学和低温生物学的发展和

将精子样本稀释至 1×1 0 个/ m L,取5 滴于预热载玻片上，加盖玻片后于显微镜下计数 2 0 0个精子，计算具有直线

运动精子数占总精子数的百分率，即为精子活力。1 . 3头部质膜完整性评价方法( P I染色)

参照张斌等的方法 J。1 0 0

H E P E S/ B S A(N a C 1

研究的不断深入，检测精子品质的手段也不断更新，发展出许 0 . 7 5 9 9 g、 K C 1 0 . 0 2 9 8 g、 H E P E S 0 . 2 3 8 3 g、 B S A 0 . 1 g、果糖多对精子功能性评价的方法 J。评价精子质量方法虽很多， 0 . 2 5 2 2 g、 M g C 1 2

6 H 2 O 0 . 1 0 2 g、 C a C 1 2 2 H 2 O 0 . 0 1 4 7 g,溶但单个精子参数均不足以判断其真实的受精能力。迄今为止，无单独一种评价方法能准确判定精子的功能，必须检测多解于 1 0 0 m L蒸馏水中)中加入 2 碘化丙啶( P I, 0 . 0 2 5 g P I 溶于 1 0 m L P B S ),再加入精液悬液 5 0 , 3 7℃孵育 3 0 m i n,

个指标才能较准确地评价精子的功能。因此，本试验研究了猪精液质量评价方法的相关性，旨在建立适用的猪精液质量评估体系。1材料与方法1 . 1猪精液来源

取1 0 精液悬液滴于载玻片中央，再滴加少量抗荧光淬灭剂D A B C O[ 1 0 mL甘油/ P B S (体积比为 9: 1 )溶液中含 D A B— C O 0 . 0 2 4 6 8 g],盖片，无色指甲油封片，在荧光显微镜 ( N i k o n, T 1一 S M)下观察。P I染色阳性者为头部精子质膜破损的死精子，其头部核区呈现红色荧光，如图 1、图 2所示。

手握法采集公猪中段精液， 4层纱布过滤除去胶状物，于3 7℃下 2 h内带回实验室，与稀释液 (米尼图 B T S按说明书配制) 1: 1等温稀释， 3 7℃内进行品质检查。收稿 E t期： 2 0 1 2—1 0— 0 9

基金项目：江苏省自然科学基金 (编号： B K 2 0 0 8 5 8 9 );江苏省高校“青蓝工程”[编号：苏教师 ( 2 0 1 0) 2 7号];江苏省无锡市产学研合作项目。

作者简介：姚1 6 3 . c o m。

静( 1 9 7 9一),女，江苏兴化人，博士，高级兽医师，主要

图1 可见光+荧光下精子PI染色结果

从事农业高新技术研究与推广研究。E—m a i l: y a o j i n g n n x h@

1 . 4尾部质膜完整性评价方法 (低渗肿胀试验)

通信作者：武彩红，女，博士，副教授，主要从事动物生殖生物学研究。E—ma i l: e a i h o n g w u 61 6@ y a h o o . e o m. e n。

参照周定杰等…的方法。1 0 0 I x L低渗液(准确称取二水柠檬酸钠 0 . 7 3 5 g、果搪 1 . 3 5 1 g,加双蒸水至 1 0 0 m L,渗透压B a c t e r i o l o g y, 1

9 8 9, 6 6 ( 5 ): 3 6 5— 3 7 8 .

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2 5—2 6.

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