发酵考试的复习思考题2

发酵考试的复习思考题

1，发酵p1及发酵工程的定义发酵：微生物工程（ Microbial engineering ）是利用微生物的特定性状和功能，通过现代化工程技术生产有用物质或直接应用于工业化生产的技术体系；是将传统发酵与现代DNA 重组、细胞融合、分子修饰和改造等新技术结合并发展起来的现代发酵技术。 2，发酵工程的特点p5 3，发酵的分类

1、根据微生物对氧的需求：1）好氧性发酵2）厌气性发酵2、按发酵培养基物理状态分1）固体发酵2）液体发酵

4，发酵产品的类型p4

5，微生物代谢产物的类型及其之间的关系p4

6，发酵过程的组成典型的发酵过程可以划分成六个基本组成部分： （1）繁殖种子和发酵生产所用的培养基组份设定； （2）培养基、发酵罐及其附属设备的灭菌；

（3）培养出有活性、适量的纯种，接种入生产的容器中； （4）微生物在最适合于产物生长的条件下，在发酵罐中生长； （5）产物萃取和精制；

（6）过程中排出的废弃物的处理。 7，发酵生产成立的条件 （1）某种适宜的微生物

（2）保证或控制微生物进行代谢的各种条件（培养基组成，温度，溶氧pH等） （3）进行微生物发酵的设备

（4）提取菌体或代谢产物，精制成产品的方法和设备 8，发酵工业发展的阶段及大致年代p6 ppt

9，和国际先进水平相比较，我国发酵工业的不足之处主要表现在哪些方面

1, 微生物代谢调节和微生物代谢调控的概念代谢调节是指在代谢途径水平上酶活性和酶合成的调节。微生物代谢调控：根据代谢调节理论,通过改变发酵工艺条件(温度、PH、风量、培养基组成)和菌种遗传特性，达到改变菌体内的代谢平衡，过量产生所需产物的目的

2,为何要进行微生物的代谢调控 改变菌体内的代谢平衡，过量产生所需产物的目的。 3， 微生物代谢调节的方式方式：反馈抑制、反馈阻遏、酶的诱导调节、 酶的共价修饰。 4， 从本质上来说，微生物的代谢是通过哪两种方式来进行的 分解代谢和合成代谢

5， 酶合成调节的方式及其定义、机制. 方式： 诱导`、阻遏 定义：通过调节酶的合成量进而调节代谢速率的调节机制，是基因水平上的调节，属于粗放的调节，间接而缓慢。 机制：用操纵子理论解释酶合成的调节有两种机制：一种是负调控机制，由调节基因的产物——阻遏蛋白起着阻止结构基因转录的作用，不能合成相应的酶。另一种是正调控机制，由调节基因的产物——激活蛋白促进RNA聚合酶的结合，从而增加mRNA的合成。

6， 酶活性调节的定义、方式 通过改变酶的催化活性来调节代谢速率的调节方式，称为酶活性调节。方式：浓度调节、生理··、共价修饰..、抑制剂··、反馈··、

7， 有分支代谢途径的调节方式有哪些 协同反馈抑制 合作反馈抑制、累积反馈抑制 顺序反馈抑制 同功酶调节

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8， 酶活性的调节机制可用什么理论来解释

9， 初级代谢的调节有哪几种方式 酶合成调节、酶活性调节 10， 次级代谢的调节方式 P75-P78

11， 提高初级和次级代谢产物产量的方法1、使用诱导物2、除去诱导物——选育组成型产生菌3、降低分解代谢产物浓度，减少阻遏的发生4、解除分解代谢阻遏——筛选抗分解代谢阻遏突变株5、解除反馈抑制——筛选抗反馈抑制突变株6、防止回复突变的产生和筛选负变菌株的回复突变株7、改变细胞膜的通透性8、筛选抗生素抗性突变株9、选育条件抗性突变株10、调节生长速率11、加入酶的竞争性抑制剂 1、补加前提类似物2、加入诱导物3、防止碳分解代谢阻遏或抑制的发生4、防止氮代谢阻遏的发生 5、筛选耐前体或前体类似物的突变株6、选育抗抗生素突变株7、筛选营养缺陷型的回复突变株

12， 高浓度细胞培养的目的、原理、优点、方法及存在的问题

1，次级代谢和次级代谢产物的概念P73 2， 次级代谢产物的分类P73-P75

3， 次级代谢产物的生物合成模式P73-75或(P74的图)

4， 在微生物的氢代谢过程中，关键的酶是什么酶，它有哪些类型 氢酶

1， 5， 氢效应的概念及产生的原因

6， 二氧化碳固定的概念、方式、生理意义 概念：指生物吸收二氧化碳转化成为有机物质而言 方式：大致可分为自养生物进行的光合成、细菌型的光合成和化学合成，以及在异养生物或自养生物所进行的二氧化碳暗固定。

7， 什么是卡尔文循环，它由哪几个部分组成 卡尔文循环(Calvin cycle)，一译开尔文循环，又称光合碳循环。是一种类似于克雷布斯循环（Krebs cycle，或称柠檬酸循环）的新陈代谢过程，可使其动物质以分子的形态进入和离开此循环后发生再生。碳以二氧化碳的形态进入并以糖的形态离开卡尔文循环。整个循环是利用ATP作为能量来源，并以降低能阶的方式来消耗NADPH，如此可增加高能电子来制造糖。 碳的固定---磷酸甘油醛(G3P(PGAL))的合成--CO2接收物的再形成

1， 原料的定义及选择原则P168

2， 培养基设计的基本原则及如何进行培养基的设计P39 3， 为何要进行原料预处理及原料预处理的方法酶p49 4， 原料粉碎的目的和方法随便说 5， 垂式粉碎机生产能力的计算

6， 干法粉碎和湿法粉碎工艺的比较中药制剂p52~53 7， 原料输送的方法

8， 气流输送的原理、流程和优点

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9， 颗粒在垂直管道和水平管道中悬浮输送的机理 10，气流输送中常用除尘装置有哪几种 11，淀粉原料水-热处理的定义及目的 12，淀粉的膨胀、糊化和液化P177

13，在淀粉的水-热处理过程中有哪些反应（变化）是我们所不希望的 14，淀粉的酶法液化和糖化工艺常用到的酶有哪些及各自的作用专一性酶p1~2 15，酶法液化的工艺有哪几种及各自的优缺点 16，淀粉液化效果的标准 17，淀粉糖化的定义和目的P177

18，淀粉糖化的理论收率、实际收率和淀粉转化率的定义及计算 19，DE值的定义 (DE值也称葡萄糖值，表示淀粉糖的糖组成) 20，淀粉糖化的工艺有哪几种，比较各自的优缺点 21，糖蜜原料的来源、特点及常用的处理方法

22，在发酵培养基中添加前提物质、抑制剂和促进剂为何能提高产物的产量

1， 何谓培养基的灭菌，它和消毒有和区别中药制剂p25 指杀灭物体中所有微生物的方法 2， 常用的灭菌方法P103 3， 致死温度、微生物热阻的定义 4， 湿热灭菌的原理和优点P103

5， 从工程角度看，设计一个培养基的湿热灭菌过程首先要解决的问题是什么P104

6， 根据微生物的热死灭动力学方程和温度对微生物热死灭常熟（K）的影响，论述为什么采用高温短时间灭菌既有利于杀灭微生物又有利于减少营养物质的破坏 7， 间歇灭菌的成功的要素及注意事项P109 8， 常用的连续灭菌工艺有哪几种P109、110 9， 连续灭菌和间歇灭菌的比较p110，中药制剂p27 10，影响灭菌的因素p107

1， 何谓无菌空气，发酵工业对空气无菌程度的要求P112 2， 空气含菌量的测定方法

3， 空气除菌的方法有哪些、这些方法的原理和优缺点P112

4， 介质过滤除菌的定义p113，机理p115；过滤介质的类型 机理P114；过滤介质的类型P116 5， 常见的空气过滤除菌工艺流程的分析计算p117 6， 过滤效率、对数穿透律 过滤效率P115、119 7， 传统空气过滤除菌工艺中的主要设备有哪些 8， 新型的空气过滤器有哪些，有何优点 9， 空气贮罐的作用是什么，其大小如何确定

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1，种子的扩大培养的定义。

2，种子的制备可分为哪两个阶段。p46

4，种子罐级数的定义，如何确定种子罐的级数。p47和48 5，种龄。p46

6，影响种子质量的因素。P49 7，菌种保藏的原理。P20

8，菌种衰退的定义，原因。防止菌种退化的措施。P23 9，菌种复壮的定义，复壮的措施。P24

1，发酵过程的定义p80 2，为何要研究发酵过程p80

3，发酵过程的主要控制参数主要分为哪三大类p151 4，发酵过程中通常测定的参数有哪些p152 5，发酵过程中参数测定的方法有哪两种p151

6，简述发酵过程的代谢变化规律。为什么要了解这一规律。P53

7，分批发酵、补料分批发酵和连续发酵的定义。对这三种发酵方式进行比较。 1分批培养

分批培养是指将细胞和培养基一次性装入反应器内，进行培炎，细胞不断生长，产物也不断形成，经过一定时间反应后，将整个反应系取出。 2流加培养

流加培养是指先将一定量的培养液装入反应器，在适宜条件下接种细胞，进行培养，细胞不断生长，产物也不断形成。随着细胞对营养物质的不断消耗，新的营养成分不断补充至反应器内，使细胞进一步生长代谢。到反应终止时，取出整个反应系。 3连续培养

连续培养是指将细胞种子和培养液一起加入反应器内进行培养，一方面新鲜培养液不断加入反应器内，另一方面又将反应液连续不断地取出，反应条件处于一种恒定状态。与分批培养和半连续培养不同，连续培养可以控制细胞所处的环境条件长时间的稳定。因此，可以使细胞维持在优化状态下，促进细胞生长和产物形成。

8，按照产物生成与菌体生长是否同步，可将分批发酵分为哪两种类型，并用公式进行表述。这种分类方法对实际生产有何指导意义p94 9，代谢变化、代谢曲线

10，温度对发酵过程有何影响？p152 11，pH值对发酵过程有何影响？p152

（1）pH影响酶的活性。当pH值抑制菌体某些酶的活性时使菌的新陈代谢受阻

（2）pH值影响微生物细胞膜所带电荷的改变，从而改变细胞膜的透性，影响微生物对营养物质的吸收及代谢物的排泄，因此影响新陈代谢的进行

（3）pH值影响培养基某些成分和中间代谢物的解离，从而影响微生物对这些物质的利用 （4）pH影响代谢方向

12，简述发酵过程中引起pH下降和上升的因素

1、基质代谢 ：（1）糖代谢 特别是快速利用的糖，分解成小分子酸、醇，使pH下降。糖缺乏，pH上升，是补料的标志之一

（2）氮代谢 当氨基酸中的-NH2被利用后pH会下降；尿素被分解成NH3，pH上升，NH3利用后pH下降，当碳源不足时氮源当碳源利用pH上升。

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（3）生理酸碱性物质利用后pH会上升或下降

2、产物形成 ：某些产物本身呈酸性或碱性，使发酵液pH变化。如有机酸类产生使pH下降，红霉素、洁霉素、螺旋霉素等抗生素呈碱性，使pH上升 3、菌体自溶，pH上升，发酵后期，pH上升。 13，发酵过程中pH的控制方式。 1、调节好基础料的pH。

2、在基础料中加入维持pH的物质，如CaCO3 ，或具有缓冲能力的试剂，如磷酸缓冲液等 3、通过补料调节pH

4、当补料与调pH发生矛盾时，加酸碱调pH 14，发酵过程中泡沫产生的原因p50

15，发酵过程中泡沫的产生有何不利的影响P50 16，在发酵过程中影响泡沫稳定性的因素有哪些P50 17，发酵过程中泡沫控制的方法。P50 18，化学消泡的机理。P50

19，发酵过程中补料控制的目的，所补的物料包括哪些类型，补料的原则及控制策略p94~95

? 目的： 解除基质过浓的抑制,解除产物的反馈抑制,解除分解代谢物阻遏作用,避免因一次性投糖过

多造成细胞大量生长，耗氧过多而造成波谷现象。原则 ： 中间补料的数量为基础料的1～3倍 。 ? 补料的原则就在于控制微生物的中间代谢，使之向着有利于产物积累的方向发展。 ? 现有的各种补料措施都是通过实验方法确定的。策略： 以经验数据或预测数据控制流加； ? 用传感器直接测定限制性基质的浓度，直接控制流加

20，临界氧浓度ppt6~15当不存在其他限制性基质时，如果溶氧浓度高于某定值，细胞的比耗氧速率保持恒定；如果溶氧浓度低于该值，细胞的比耗氧速率就会大大下降；则该值即为临界溶氧浓度。

21，请叙述发酵过程中溶解氧的一般变化规律ppt6~5。批式发酵无DO控制情况下，溶氧变化规律为“波谷现象” 溶解氧：作为环境因素对微生物反应有直接影响； 被好氧性微生物吸收消耗，并直接参与生长代谢过程，可视为一种营养性底物。难溶：25°C、一个大气压，空气中的O2在纯水中的溶解度仅0.25mol/m3。发酵液中含有各种成分，其溶解度更低。

22，二氧化碳对发酵的影响及其机理，发酵过程如何控制二氧化碳CO2及HCO3-都会影响细胞膜的结构，使膜的流动性及表面电荷密度发生变化，导致许多基质的跨膜运输受阻，影响了细胞膜的运输效率，使细胞处于“麻醉”状态，细胞生长受到抑制，形态发生改变

23，发酵过程的基本自控系统包括哪些p152一）前馈控制（二）反馈控制 24，发酵动力学的定义，研究发酵动力学的目的。P80 25，研究发酵动力学方法有哪两种？

26，简述Monod方程与米氏方程的区别与联系。根据实验结果计算Monod方程的参数p89

27，恒化器和恒浊器的定义。P91一种微生物连续培养器。它以恒定的速度流出培养液，使容器中的微生物生长繁殖始终低于最快生长速度。这种容器反映的是培养基的化学环境恒定。而恒浊器反映的是细胞浊度（浓度）的恒定。

28，在连续培养过程中，其实际结果为何会和理论推导的结果发生偏差p93

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29，宏观产率系数

30，理论代谢产物产率的计算

31，分批发酵、补料分批发酵和连续发酵动力学方程的推导 32，研究连续培养动力学有何用途p93

1、酒精发酵设备的基本要求 1，满足酒精发酵发酵的工艺要求；2满足酒精酵母生长和代谢的必要工艺条件，《1》将发酵反生的热量及时移走。《2》有利于发酵液的排除，设备的清洗，维修以及设备制造安装方便等问题

2、酒精发酵罐的冷却装置有哪三种形式？P129

3、微生物在厌氧发酵过程中总的发酵热一般有生物合成热Q1，蒸发热损失Q2罐壁向周围散失的热损失Q3等三部分热量组成。

4、酒精发酵罐罐数的计算N=nt/24+1 5、啤酒圆筒体锥底发酵罐的优缺点P132

1，常用的通风发酵罐有哪几种类型P136 2，机械搅拌发酵罐的基本要求P136

3，机械搅拌发酵罐的搅拌器的作用和种类P137 4，挡板的作用P138 5，全挡板条件P138 6，消泡器的作用和种类P138

7，发酵罐上常用的轴封有哪两种，比较其优缺点P139

8，机械搅拌发酵罐的冷却装置有哪三种？各适用于什么场合？比较其优缺点？P140 9，自吸式发酵罐的充气原理P143

10，气升式发酵罐的工作（充气）原理平p141

11，P141搅拌器的轴功率po：搅拌器以既定的转速旋转时，用以克服介质的阻力所需要的功率。--不通气时搅拌器输入液体的功率。

12，影响搅拌器输入搅拌液体的功率的因素

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13，功率准数NP：机械搅拌所施于单位体积被搅拌液体的外力与单位体积被搅拌的惯性力之比。

14，根据功率准数所表征的意义推导下式 15，机械搅拌发酵罐主要由哪三个部分组成及各自的作用p136一搅拌器和挡板（D）轴封（E）消泡装置 16，根据产品的年产量计算所需发酵罐的数量，并计算发酵罐的结构尺寸p137~140

17，了解机械搅拌发酵罐的结构p136 a）罐体b）搅拌器和挡板C）空气分布装置（D）轴封（E）消泡装置

18，空气中的氧进入到细胞中要经过哪些步骤p121

19，根据氧的传质方程，请叙述影响氧传递的因素。P123三 一、氧传递的阻力。在好氧发酵中，对微生物的供氧过程，首先是气相中的氧溶解在发酵液中，然后传递到细胞内的呼吸酶位置上而被利用。这是一系列的传递过程，这些传递过程又可分为供氧及耗氧两个方面。供氧方面 ： 包括通过气膜、气-液界面、液膜及液体主流的扩散。耗氧方面 ：包括氧分子自液体主流通过液膜、菌丝丛、细胞膜及细胞内的扩散。1、供氧方面的阻力。1）气膜阻力。2） 气液界面阻力。3）液膜阻力。4）液流阻力。2、耗氧方面的阻力。1）细胞周围液膜阻力。2）菌丝丛或团内的扩散阻力。3）细胞膜的阻力。4）细胞内反应阻力

1，何谓“杂菌”？ 发酵过程中除了生产菌以外，还有其它菌生长繁殖

2，不同染菌途径对发酵的影响种子带菌，无菌空气带菌，设备渗漏，灭菌不彻底，操作管理不当。 3，染菌是如何影响产物提取和产品质量的影响过滤速度

4，无菌试验的目的 防止实验室的培养物被其他外来微生物污染

5，杂菌的检查方法有哪几种？各种检查方法的比较？1、染菌的检查（1）显微镜检查法（最简单、最直接、

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最经常）（2）平板划线培养或斜面培养检查法； 平板制好后，应先保温24小时，确定无菌（3）肉汤培养基检查法（酚红变色pH6.8-8.4）2、以上3种检查法的不足 以上3种检查法未发现染菌，还不能肯定未被染菌；原因是以上检查法只能检查杂菌浓度较大的染菌情况（>1个/ml） 6，总染菌率 发酵染菌批数/总投料批数×100％

7，试从不同染菌规模分析各自引起染菌的原因。1、单罐染菌。不是系统问题，而是该罐本身的问题。如种子带菌、培养基灭菌不彻底、罐有渗漏、分过滤器失效。2、多罐染菌。系统问题，如空气过滤系统有问题，特别是总过滤器长期没有检查，可能受潮失效；移种或补料的分配站有渗漏或灭菌不彻底3、前期染菌。种子带菌、培养基灭菌不彻底。4、中后期染菌。补料的料液灭菌不彻底或补料管道、阀门渗漏，一般不会是种子问题

8，试从染菌分析染菌的可能原因有哪几种？（1）种子培养期染菌。由于接种量较小，生产菌生长一开始不占优势，而且培养液中几乎没有抗生素（产物）或只有很少抗生素（产物）。因而它防御杂菌能力低，容易污染杂菌。如在此阶段染菌，应将培养液全部废弃。（2）发酵前期染菌。原因 发酵前期菌量不很多，与杂菌没有竞争优势；且还未合成产物（抗生素）或产生很少，抵御杂菌能力弱

9，种子带菌的原因可能有哪几种种子带菌的防止（1）培养基及用具灭菌要彻底，应防止假压；（2）菌种在转接过程中受污染：操作不当，管理不严；（3）菌种在培养或保存过程中受污染

10，无菌室的基本要求及其所要求的无菌程度菌室应设有无菌操作间和缓冲间，无菌操作间洁净度应达到10000级，室内温度保持在20-24℃，湿度保持在45-60%。超净台洁净度应达到100级。

11，造成设备泄漏可能有哪些原因发酵设备及附件由于化学腐蚀、电化学腐蚀，物料与设备摩擦造成机械磨损以及加工制作不良等原因会导致设备及附件渗漏。设备上一旦渗漏，就会造成染菌，例如冷却盘管、夹套穿孔渗漏，有菌的冷却水便会通过漏孔而进入发酵罐中招致染菌。阀门渗漏也会使带菌的空气或水进入发酵罐而造成染菌。设备上的漏隙如果肉眼能看见，容易发现，也容易治理；但有的微小泄漏，肉眼看不见，必须通过一定的试漏方法才能发现 。

12，盘管试漏方法有哪两种？试漏方法可采用水压试漏法。即被测设备的出口处装上压力表，将水压入设备，待设备中压力上升到要求压力，关闭进出水，看压力有否下降。压力下降则有渗漏。但有些渗漏很小，看不出何处漏水，可以用稀碱溶液压入设备，然后用蘸有酚酞的纱布揩，只要酚酞能变红处即为渗漏处。

阀门渗漏可以用集气桶来试漏。方法是先在集气桶中装满水，然后关闭所有阀门，向发酵罐中通入空气，使罐压上升到要求压力，一般一公斤以上。由于集气桶连通各管道，观察哪根管子冒泡，即这根管子的阀门漏气。

13，发酵罐管路的连接方式有哪三种，1 螺纹连接 2焊接连接 3法兰连接并对这三种连接方式进行比较 p140

14，何谓死角指灭菌时因为某些原因使灭菌温度达不到或不易达到的局部位置

15，发酵工厂的管路采用法兰连接时，如安装或操作不当有可能会形成哪些死角 法兰连接很容易使两边管道中心线错位,形成死角. 垫片与法兰面之间容易滑动形成缝隙, 这对有GMP要求的地方是不允许的. 16，请问下图中的管道连接方式有何不合理之处，为什么？请画出正确的连接方式

17，预防噬菌体感染的措施有哪些。1、必须建立工厂环境清洁卫生制度，定期检查、定期清扫，车间四周

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有严重污染噬菌体的地方应及时撒石灰或漂白粉。2、车间地面和通往车间的道路尽量采取水泥地面。3、种子和发酵工段的操作人员要严格执行无菌操作规程，认真地进行种子保管，不使用本身带有噬菌体的菌种。感染噬菌体的培养物不得带入菌种室、摇瓶间。4、认真进行发酵罐、补料系统的灭菌。严格控制逃液和取样分析和洗罐所废弃的菌体。对倒罐所排放的废液应灭菌后才可排放。5、选育抗噬菌体的菌种，或轮换使用菌种。6、发现噬菌体停搅拌、小通风，将发酵液加热到70~800C杀死噬菌体，才可排放。发酵罐周围的管道也必须彻底灭菌。

18，在实际生产过程中，如何从过程检查结果分析判断染菌的原因，并提出解决的措施。以染噬菌体为例进行说明：1、镜检可发现菌体数量明显减少，菌体不规则，严重时完全看不到菌体，且是在短时间内菌体自溶。2、发酵pH值逐渐上升，4~8小时之内可达8.0以上，不再下降。3、发酵液残糖高，有刺激臭味，粘度大，泡沫多。4、生产量甚少或增长缓慢或停止。有无染噬菌体，根本的要做噬菌斑检验。 1， 下游加工过程的定义生物化工产品系通过微生物发酵过程，酶反应过程或动植物细胞大量培养获得，从上述发酵液，反应液中分离，精致有关产品的过程称为下游加工过程。

2， 发酵下游加工过程的特点1. 发酵液的复杂性造成分离上的困难性。 2. 欲提取的产物通常浓度低且很不稳定。3. 多为分批操作，各批发酵液不尽相同， 要求下游加工有一定弹性。 3， 对一具体发酵产品，在确定其下游加工工艺时应考虑哪些因素

4， 发酵产品的下游加工工艺过程可分为哪四个阶段1.预处理和固液分离：加速固液相分离 2.细胞破碎，分离胞内产物 3.初步纯化（提取）：除去与产物性质差异很大的杂质 4.高度纯化（精制）：除去与产物性质相似的杂质

5， 发酵液凝聚和絮凝的机理 凝聚作用是指在某些电解质作用下，使扩散双电层的排斥电位降低，破坏胶体系统的分散状态，使胶体粒子聚集的过程 絮凝作用是指在某些高分子絮凝剂作用下，悬浮粒子之间产生架桥作用而使胶粒形成粗大的絮凝团的过程

6， 影响絮凝因素有哪些 pH值，污水种类，污染物浓度，使用浓度，混合方式，混合速度，温度都有影响的

7， 在发酵工业中，常用的固液分离设备有哪几种类型 鼓式真空过滤机 板框压滤机倾析式离心机

8， 错流过滤 切向流过滤则是指液体的流动方向是平行于膜表面的，在压力的作用下只有一部分的液体穿过滤膜进入下游，这种操作方式也有人称之为“错流过滤

9， 微生物细胞破碎的技术有哪些机械法 物理法 化学法 生物法（酶解）

10，如何选择细胞破碎的方法 选择破碎法的依据：细胞的处理量：大规模，则一般采用机械法，而实验室规模的，则选择非机械法。细胞壁的强度和结构：酵母和真菌，含有纤维素和几丁质，比细菌的胞壁强

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度大，应选择高压匀浆法。而对于有高度分之的微生物，会阻塞匀浆气阀而不能应用。目的产物对破碎条件的敏感性：破碎程度：由于破碎会使细胞碎片细小，使固液分离困难，所以，适宜的操作条件是高的产物释放率，低能耗和便于后续提取三个方面权衡。

11，盐析的定义及其机理和优缺点 定义：盐析一般是指溶液中加入无机盐类而使某种物质溶解度降低而析出的过程。优缺点：1. 成本低，不需要特别昂贵的设备。2. 操作简单、安全。3. 不会引起蛋白质变性，经透析去盐后，能得到保持生物活性的纯化蛋白质。4. 效果不理想，通常只是作为初步的分离纯化，还需要结合其它的纯化方法。

12，有机溶剂沉淀的原理和优缺点 极性强的有机溶剂能破坏蛋白质的水化层而使蛋白质沉淀

13，等电沉淀的原理和优缺点 在等电点时，蛋白质分子以两性离子形式存在，其分子净电荷为零，此时蛋白质分子颗粒在溶液中因没有相同电荷的相互排斥，分子相互之间的作用力减弱，其颗粒极易碰撞、凝聚而产生沉淀，所以蛋白质在等电点时，其溶解度最小，最易形成沉淀物。等电点时的许多物理性质如黏度、膨胀性、渗透压等都变小，从而有利于悬浮液的过滤

14，吸附法的原理、优缺点，吸附的类型 是指物质（主要是固体物质）表面吸住周围介质（液体或气体）中的分子或离子现象 附剂的条件是比表面积大，容易吸附和脱附，来源容易，价格较低 15，影响吸附过程的因素有哪些 温度 PH值 压力

16，离子交换作用，以及影响离子交换速度的因素 1、树脂交换基团。2、树脂交联度3、树脂的粒度4、溶液中的例证浓度5、溶液温度。6、流速7、离子本性。

17，膜分离技术的优点 1在常温下进行 有效成分损失极少，特别适用于热敏性物质，·2无相态变化 保持原有的风味，能耗极低·3无化学变化 典型的物理分离过程，不用化学试剂和添加剂，产品不受污染 4·选择性好 可在分子级内进行物质分离，具有普遍滤材无法取代的卓越性能 5·适应性强 处理规模可大可小，可以连续也可以间隙进行，工艺简单，操作方便，易于自动化

18，常用的膜分离设备包括哪四种类型1板框式膜组件 2管式膜 3中空纤维膜组件 4卷式膜组件 19，浓差极化、凝胶层 浓差极化：在电解过程中，电极附近某离子浓度由于电极反应而发生变化，本体溶液中离子扩散的速度又赶不上弥补这个变化，就导致电极附近溶液的浓度与本体溶液间有一个浓度梯度，

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这种浓度差别引起的电极电势的改变称为浓差极化. 凝胶层：由聚合度较大，不溶于乙醚，可能还具有支链或交联结构的橡胶烃分子聚集而成的橡胶粒子的中间层

20，膜的清洗方法有哪两种

21，纳滤的特点① 膜结构绝大多数是多层疏松结构；

② 分离过程无任何化学反应，无需加热，无相转变，不会破坏生活活性，不会改变风味、香味。 22，反渗透 是以膜两侧静压差为推动力，克服溶剂的参透压，通过反渗透膜的选择透过性使溶剂

（通常是水）透过而离子物质被截留，从而实现对液体混合物进行分离的膜过程。

23，萃取的分配定律 一定温度下，该化合物与此两种溶剂不发生分解、电解、缔合和溶剂化等作用时，此化合物在两液层中之比是一个定值。

24，两水相及其优点

25，超临界流体萃取的原理，其典型流程包括哪三种类型 是利用超临界流体的溶解能力与其密度的关系，即利用压力和温度对超临界流体溶解能力的影响而进行的。在超临界状态下，将超临界流体与待分离的物质接触，使其有选择性地把极性大小、沸点高低和分子量大小的成分依次萃取出来。

1，固定化细胞的定义、优缺点、分类 酶p92p93p94 2，细胞固定化的方法及其比较 酶 p94

3，固定化细胞反应器的优点，主要有哪些类型 p150 2

1， 基因工程狭义的基因工程仅指用体外重组DNA技术去获得新的重组基因；广义的基因工程则指按人们意愿设计，通过改造基因或基因组而改变生物的遗传特性

2， 如何获得一个工程菌用生物工程技术将多种微生物的降解性基因从细胞中取出，然后组装到一个细胞中，使这个菌株集多种微生物的降解性功能的降解性基因从细胞中取出，然后组装到一个细胞中，使这个菌株集多种微生物的降解性功能于一身，同时可以降解多种化合物。这样的菌株我们称为工程菌。

3， 一个可用于工业化生产的工程菌必须符合哪些要求多功能、高效和适应性强，可以提高发酵的效率

4， 物理密封、生物学密封 实验规模在20L以下时，物理密封由密封设施、实验室设计和实验注意事项组成。密封程度分为P1、P2、P3和P4级，数字越大，密封水平越高。生物学密封要求用只有在特殊培养条件下才能生存的宿主，同时用不能转移至其它活细胞的载体，通过这样组合的宿主载体系统，可以防止重组菌向外扩散。按密封程度分B1和B2级，B2级的密封要求最严格。

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5， 和天然细胞培养过程相比，工程菌的培养过程有何特点高表达的障碍是：外源基因的不稳定，造成表达的下降。高生长速率与高表达之间的矛盾，乙酸的产生，蛋白的降解

6， 在工程菌中，质粒的不稳定性有哪两种类型结构的不稳定性，分离的不稳定性

7， 影响工程菌中质粒的稳定性的因素有哪些，如何提高工程菌中质粒的稳定性培养基配方、培养温度、pH值范围，溶氧水平（好氧菌）;（ 1）组建合适载体 2选择适当宿主（3）施加选择压力4）控制基因过量表达

8， 质粒保持率质粒保持率Fn的概念，Fn表示分批培养中细胞分裂n次后，培养液中基因工程细胞数与总细胞数的比值，即

9， 在工程菌体的培养过程中，必须要工程菌的外漏，从工程角度分析，在培养过程中，有哪些方面可能会造成工程菌的外漏 (1)排气，(2)机械密封，(3)接种，(4)取样，(5)培养后的灭菌(通入湿热蒸气)，(6) 排液(输至下一工序)。

1， 动植物细胞培养与微生物细胞培养有何区别 动植物细胞培养与微生物细胞培养有很大的不同。由于动物细胞无细胞壁，且大多数哺乳动物细胞附着在固体或半固体的表面才能生长；对营养要求严格，除氨基酸、维生素、盐类、葡萄糖或半乳糖外，还需有血清。动物细胞对环境敏感，包括pH值、溶氧、CO2、温度、剪切应力都比微生物有更严的要求，一般须严格的监测和控制。相比之下，植物细胞对营养要求较动物细胞简单，但由于植物细胞培养一般要求在高密度下才能得到一定浓度的培养产物，以及植物细胞生长较微生物要缓慢，长时间的培养对无菌要求及反应器的设计提出特殊的要求。

2， 常用的动物细胞培养方法有哪些、⒈ 分批式培养⒉ 流加式培养⒊ 半连续式培养⒋ 连续式培养各自的优点 p148 p150

3， 动物细胞悬浮培养法 p147

4， 动物细胞培养的条件控制有何特殊要求 p147

5， 培养植物细胞的培养基的主要组成，培养基的成分由碳源、有机氮源、无机盐类、维生素、植物生长激素和有机酸等物质组成。选择培养基的主要原则 p38三

6， 植物细胞大规模培养的方式有哪些 植物细胞的大规模悬浮培养 、植物细胞或原生质体的固定化培养7， 影响植物细胞培养的因素 ⒈ 细胞的遗传特性⒉ 培养环境⑴ 温度 ⑵ pH值 ⑶ 营养成分⑷ 光⑸ 搅拌和通气⑹ 前体 ⑺ 生长调节剂

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