丹参酮_A与丹参酮_A磺酸钠对HepG2细胞的抑制作用

华西药学杂志W C J ·P S

2010，

25（2）∶153 155同其浓度无必然联系。根据文中结果，

2%氮酮对莫诺本宗乳膏促渗作用大于5%氮酮，证明氮酮对莫诺本宗乳膏的促渗作用存在最佳浓度，并非与浓度呈正相关。

莫诺苯宗不溶于水，溶于有机溶剂。作者选取加样回收率为指标，分别对不同接收液（生理盐水、生理盐水+5%乙醇、生理盐水+10%乙醇、生理盐水+15%乙醇、生理盐水+20%乙醇、生理盐水+30%乙醇、生理盐水+50%乙醇1∶1混合）进行筛

选，

结果表明：生理盐水与30%乙醇混合液的加样回收率的相对标准偏差最小，对莫诺苯宗的溶解性能最好，为最佳接收液。在体外渗透实验中，磁力搅拌器转速的范围通

常为100 500r ·min －1。为确定最佳转速，作者分别

考察了水浴37?1?条件下，

不同转速（100、250、500r ·min －1）时莫诺本宗乳膏的透皮吸收情况，数据显示：不同转速对莫诺本宗乳膏透皮吸收未产生显著影响，因此，为了更好地模拟体内环境，将搅拌

器转速定为100r ·min －1

。此外，实验中，要保证接收液液面充分接触到离体鼠皮，需防止气泡的产生；

定时补充的接收液需与透皮装置中的接收液保持温度一致，以免影响透皮效果。参考文献：

［1］张爱华，张悦晗，陈新菊.RP －HPLC 法测定莫诺苯宗的含量［J ］.药学实践杂志，2003，21（6）：350－351.

［2］

王海艳，丁振锋，朗朗等.桂皮酸透皮吸收影响因素的研究［J ］.上海中医药大学学报，2008，22（5）：68－70.

收稿日期：2009－03－10

基金项目：教育部博士点基金新教师项目（编号20070610050）作者简介：石华月（1986—），女，正攻读药剂学专业的硕士学位。*通信作者（Correspondent author ），Email ：xinba789@9548ce32a32d7375a4178068

丹参酮ⅡA 与丹参酮Ⅱ

A 磺酸钠对HepG2细胞的抑制作用石华月1

，储

婷1

，李

慧2，毛声俊

1*

（1.四川大学华西药学院，四川成都610041；2.四川省人民医院，四川成都610072）摘要：目的

比较丹参酮Ⅱ

A 与丹参酮ⅡA 磺酸钠对人肝癌HepG2细胞的体外增殖抑制作用。方法采用改良MTT 法测定

丹参酮ⅡA 与丹参酮ⅡA 磺酸钠对HepG2的增殖抑制作用，倒置显微镜下观察两者对HepG2细胞的形态学影响。结果3.4 27.2μmol ·L －1丹参酮ⅡA 对HepG2细胞有明显的增殖抑制作用，并呈时间和剂量依赖性，而对应各浓度丹参酮ⅡA 磺酸钠对HepG2细胞均无增殖抑制作用。结论丹参酮ⅡA 对HepG2细胞具有显著增殖抑制作用，其与丹参酮Ⅱ

A 磺酸钠在抗肝癌的药效方面可能存在差异。

关键词：丹参酮ⅡA ；丹参酮ⅡA 磺酸钠；人肝癌HepG2细胞；抑制中图分类号：R96

文献标志码：A

文章编号：1006－0103（2010）02－0153－03

Inhibition effect of Tanshinone ⅡA and sodium tanshinone ⅡA sulfonate on human hepatoma

carcinoma HepG 2cells

SHI Hua －yue 1，CHU Ting 1，LI Hui 2，MAO Sheng －jun 1*

（1.West China School of Pharmacy ，Sichuan University ，Chengdu ，Sichuan ，610041P.R.China ；2.Hospital of Sichuan Province ，Chengdu ，Sichuan ，610072P.R.China ）Abstract ：OBJECTIVE

To investigate inhibition effect of tanshinone ⅡA （Tan ⅡA ）and sodium Tan ⅡA sulfonate on human hepa-toma carcinoma HepG2cells in vitro .METHODS

The inhibition effect of Tan ⅡA and sodium Tan ⅡA sulfonate on HepG2were

evaluated by modified MTT assay and the changes in cell morphology were observed by inverted phase contrast microscope.RESULTS The proliferation of HepG2cells was significantly suppressed by Tan ⅡA group （3.4－27.2μmol ·L －1）in a time and dose depend-ent manner ，while no growth inhibition was observed on HepG2cells in Sodium Tan ⅡA sulfonate group containing corresponding drug concentration.CONCLUSION

Tan ⅡA has a marked inhibition effect on growth of HepG2cells ，which may lead to a difference on

anti －hepatoma effect between Tan ⅡA and sodium Tan ⅡA sulfonate.

Key words ：Tanshinone ⅡA ；Sodium tanshinone ⅡA sulfonate ；Human hepatoma carcinoma HepG2cells ；Inhibite CLC number ：R96

Document code ：A

Article ID ：1006－0103（2010）02－0153－03

丹参酮ⅡA（tanshinoneⅡA，TanⅡA）具有抗氧化、抗癌等多种药理作用［1－4］。由于其水中难溶，口服给药生物利用度低，迄今无任何制剂上市销售。研究人员为增大其溶解度，将其制备成丹参酮ⅡA 磺酸钠（STS），现已在临床上广泛应用。然而值得注意的是：丹参酮ⅡA磺酸钠在化学结构上并非丹参酮ⅡA盐的形式，二者由于理化性质不同导致抗肿瘤活性可能存在显著差异。TanⅡA能明显抑制人肝癌细胞HepG2、SMMC－7721、Bel－7402生长［4－6］。STS对裸鼠胃癌、结肠癌模型有抗癌作用［7－10］，但关于其抗肝癌方面的研究尚未见报道。现以人肝癌细胞株HepG2为细胞模型，通过研究TanⅡA与STS对HepG2细胞的体外增殖抑制作用，比较二者对HepG2细胞的体外增殖抑制作用差异，为探讨两者的构效关系及进一步开发TanⅡA制剂提供实验依据。

1实验部分

1.1仪器与试药

BC－J160S型CO

2

培养箱（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）；CFM－500型倒置荧光显微镜（上海长方光学仪器有限公司）；XSP－10C生物显微镜（上海长方光学仪器有限公司）；Model－680酶联免疫检测器（美国Bio－Rad）；MB100－4P微孔板恒温振荡器（杭州奥盛仪器有限公司）；Costar96孔培养板（美国）。TanⅡA（HPLC测得纯度99.2%，西安天丰生物科技有限公司）；STS注射液（自制）；RPMI－1640（美国Gibico）；标准新生牛血清（郑州伯安生物工程有限公司）；胰蛋白酶、MTT（Bio-sharp）；台盼蓝（上海源聚生物科技有限公司）；二甲基亚砜（DMSO）、二甲基甲酰胺（DMF）、十二烷基硫酸钠（SDS）均为分析纯；人肝癌细胞（生物治疗国家重点实验室）。

1.2方法和结果

1.2.1细胞培养和实验分组人肝癌细胞HepG2培养于RPMI1640培养液（10%灭活标准新生牛血清、100U·mL－1青霉素、100μg·mL－1链霉素）中，于

37?、5%CO

2

饱和湿度条件下培养。TanⅡA用DMSO溶解，使DMSO终浓度为0.03%（一般认为DMSO≤0.1%时，不引起细胞生物学形状的改变）。将TanⅡA分为3.4、13.6、27.2μmol·L－1组和等摩尔比浓度、13.6、27.2μmol·L－1TanⅡA磺酸钠组（TanⅡA、STS分子量分别为294.33、396.39），阴性对照组加入等体积的培养液。

1.2.2改良MTT法检测各组药物对HepG2的生长抑制率［11］取对数生长期的细胞（存活率99.3%）接种于96孔培养板上，调整细胞浓度为每孔5?104，每孔体积为100μL。每组设8个复孔，37?、5%CO

2

孵箱内培养4h贴壁后每孔分别加入各组药液20μL。加药后，每日取药物处理组与阴性对照组细胞，每孔加入MTT液20μL（5mg·mL－1），4 h后每孔加入甲瓒裂解液100μL，37?孵箱中放置过夜，微孔板在37?恒温震荡仪上震荡10min。用酶联免疫检测仪（测试波长570nm，参比波长630 nm）测定各孔光密度（OD）值，计算细胞抑制率=（1－药物组平均OD值/对照组平均OD值）?100%。

1.2.3倒置显微镜观察加药实验过程中，分别于不同时间观察HepG2细胞经不同浓度TanⅡA、STS 作用后细胞的生长和贴壁情况。阴性对照组的HepG2细胞在镜下可见贴壁生长，细胞清晰，胞质饱满，核膜、核仁轮廓明显，相邻细胞生长融合成片（图1A）；经TanⅡA处理的细胞，24h后见其细胞逐渐由贴壁而脱落，72h时脱落更明显，脱落细胞悬浮于培养液中，细胞形态变圆，生长增殖明显受抑（图1B），且浓度越高，生长抑制越明显。经各浓度STS处理后的细胞形态与阴性对照组相比无显著差异（图1C）。

A B C

图1人肝癌HepG2细胞培养72h后的倒置显微镜图

Fig1Invert microscope photos of human hepatoma carcinoma HepG2cells for72h

1.2.4药物对HepG2的生长抑制作用与对照组比较，各浓度TanⅡA处理后HepG2的平均OD值都明显下降，且随药物作用浓度的增高和作用时间的延长，平均OD值下降明显。各组与对照组相比有统计学差异（P<0.05）。各浓度STS作用后，HepG2细胞的平均OD值与对照组平均OD值比较都无明显变化。结果表明：3.4 27.2μmol·L－1Tan ⅡA对HepG2细胞有明显生长抑制作用，且随药物浓度的增高和药物作用时间的延长，对HepG2的生长抑制作用增强，呈现出明显的时间和剂量依赖性。而对应各等摩尔浓度的STS对HepG2细胞均无生长抑制作用（表1）。

1.2.5统计学处理采用SPSS11.5进行统计学分析，数据以珋x?s表示，以P<0.05为具有统计学意义。

451华西药学杂志第25卷

表1

丹参酮Ⅱ

A 与丹参酮ⅡA 磺酸钠对人肝癌HepG2细胞的生长抑制作用（n =3）Table 1Inhibition effect of Tan ⅡA and sodium Tan ⅡA sulfonate on human hepatoma carcinoma HepG2cells （n =3）

Groups Dose /

μmol

·L －124h

OD 570inhabition /%48h

OD 570

inhabition /%72h

OD 570

inhabition /%Control 0.880?0.063

1.040?0.0980.948?0.099

Tan ⅡA

3.40.791?0.034*10.20.893?0.088*1

4.30.794?0.039*16.013.60.651?0.039

*

26.00.532?0.035

*

48.80.395?0.028

*

58.327.2

0.559?0.048*

36.50.466?0.043*55.20.325?0.019*65.7STS 3.40.897?0.076－ 1.196?0.087－ 1.018?0.082－13.60.881?0.073－ 1.112?0.092－ 1.016?0.081－27.6

0.893?0.041

－

1.041?0.088

－

0.954?0.076

－

Compared with control group ：*P <0.05

2讨论

丹参酮ⅡA （Tan ⅡA ）在实验浓度范围内对

HepG2细胞有明显的生长抑制作用，并呈明显的时间和剂量依赖性；而丹参酮ⅡA 磺酸钠（STS ）对HepG2细胞无生长抑制作用。结果表明：Tan ⅡA 与STS 对体外培养的人肝癌HepG2细胞的增殖抑制存在显著差异。推测其原因可能是由于Tan ⅡA 为亲脂性分子结构，易进入HepG2细胞内进而与DNA

小沟结合产生抑癌作用［12］

，而当STS 后分子极性显著增加，无法透过细胞膜进入胞内而导致其对HepG2细胞的增殖抑制活性丧失。提示Tan ⅡA 与STS 在抗肝癌药效方面可能存在差异。课题组下一步拟考察二者对其他人肝癌细胞株的体外增殖抑制作用及其对人肝癌裸鼠模型的体内抗肿瘤药效差异。文中结果将有助于探讨Tan ⅡA 与STS 的构效关系，为进一步开发Tan Ⅱ

A 的抗癌制剂提供实验依据。参考文献：

［1］梁勇，羊裔明，袁淑兰.丹参酮药理作用及临床应用研究进展［J ］.中草药，2000，31（4）：304－306.

［2］彭招华，袁侣明，韩民利.丹参的药理作用研究概况［J ］.中药材，

2001，24（9）：690－693.［3］

袁淑兰，宋毅，王修杰.丹参酮ⅡA 抑制多种肿瘤细胞生长的

体外实验研究［

J ］.华西药学杂志，2003，18（15）：327－329.［4］

杜睿，郑鸿，王艳萍，等.丹参酮II A 逆转人ER 阳性乳腺癌细胞的恶性表型及其机理［J ］.华西药学杂志，2009，24（1）：35－38.

［5］

Zhong ZH ，Chen WG ，Liu YH.Inhibition of cell growth and in-duction of apoptosis in human hepatoma cell line HepG2by tan-shione IIA ［

J ］.中南大学学报：医学版，2007，32（1）：99－103.［6］

唐忠志，付立波，唐英.丹参酮ⅡA 抑制人肝癌细胞的生长及诱导其凋亡的实验研究［J ］.第三军医大学学报，2003，25（9）：774－777.

［7］

唐忠志，唐英，付立波.丹参酮ⅡA 对人肝癌Bel －7402细胞生长的影响及其机制［J ］.第一军医大学学报，2003，23（6）：595－601.

［8］

陈坚，钟良，钱立平，等.丹参酮ⅡA 磺酸钠对MKN －45胃癌裸鼠移植瘤增殖及血管生成的影响［J ］.世界华人消化杂志，2008，16（22）：2507－2511.

［9］

姜剩勇，谷容，王永红，等.丹参酮ⅡA 磺酸钠在结肠癌裸鼠移植瘤模型中增殖及血管生成的实验研究［J ］.第四军医大学学报，

2009，30（11）：971－974.［10］卢业才，李启信，束庆兵，等.丹参酮Ⅱ

A 磺酸钠联合顺铂腹腔化疗对胃癌生长的影响［J ］.肿瘤基础与临床，2009，22（2）：121－124.

［11］安云飞，廖春华，边寰峰.改良MTT 法检测HepG2细胞增殖

的研究［

J ］.毒理学杂志，2006，20（3）：186－187.［12］Zhang Z ，Gao J ，Wang Y ，et al.Tanshinone ⅡA triggers p53re-sponses and apoptosis by RNA polymerase Ⅱupon DNA minor groove binding ［J ］.Bioch Pharmacol ，2009，78：1316－1322.

收稿日期：櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆櫆殰

殰

殰

殰

2009－10－10

《华西药学杂志》被英国皇家化学学会系列数据库收录。欢迎订阅！欢迎投稿！

5

51第2期

石华月，等。丹参酮ⅡA 与丹参酮ⅡA 磺酸钠对HepG2细胞的抑制作用

本文来源：https://www.bwwdw.com/article/0jqq.html