高品质竹叶多糖的筛选及含量测定方法的研究

Oct.2008268现代化工

ModernChemicalIndustry

第28卷增刊(2)2008年10月

高品质竹叶多糖的筛选及含量测定方法的研究

叶建中,陈文英,王成章,周　昊,郑光耀

(中国林业科学研究院林产化学工业研究所;国家林业局林产化学工程重点开放性实验室,

江苏南京210042)

摘要:以硫酸-蒽酮比色法,葡萄糖为标准品,建立竹叶中多糖的分析方法,对27种竹叶中多糖活性组分的含量进行了测定。结果表明:多糖质量分数在1194%～5169%,其中多糖质量分数在4%以上的有绿竹、毛竹、鹅毛竹、小叶箬竹、矮箬竹、铺地竹、百夹竹等,淡竹、绿竹、毛竹分布广、多糖含量较高,成为工业上提取竹叶多糖活性组分的最佳原料;而鹅毛竹含量特别高,但是分布较少。同品种的竹叶上下部位多糖含量有所不同,且含量都是下部老叶高于上部嫩叶。

关键词:竹叶多糖;含量;分光光度法中图分类号:TQ91;Q539　

文献标识码:A　

文章编号:0253-4320(2008)S2-0268-03

ScreeningofPolysaccharideandstudyontheiranalysisforhigh2qualitybambooleaves

YEJian2zhong,CHENWen2ying,WANGCheng2zhang,ZHOUHao,ZHENGGuang2yao

(InstituteofChemicalIndustryofForestProduct,CAF;KeyandOpenLaboratoryonForestChemicalEngineering,SFA,

Nanjing210042,China)

Abstract:ToestablishUVmethodtodeterminetheactiveconstituentpolysacchrideinbambooleaves,withcontentofglucoseasparameters,theoptimumcolorimetricmethodwasselectedbyuseofsulfuricacid2anthrone.Thecontentofpolysaccharidein27breedsofbambooleavesweredetermined.Theresultwasconcludedthatthetotalpolvsaccharidesmasspercentwerebetween1194%-5169%.ThecontentofpolysaccharideofDendrocauamopsisoldhami.(munro)Kengf,Ph.edulis(Carr)A.etc.Riv,Sh.chinensisNakai,I.victorialisKengf,Keng)Kengf,SasaargenteastriatusE.G.Camus,Ph.nidulariaMunroetcwerehigherthan4%.ThebreedsofPh.glaucaMcClue,Dendrocauamopsisoldhami.(munro)KengfandPhedulis(Carr)A.etC.Rivdistributedwidelyandwerebettermaterialsbecauseofcontainingmorepolysaccharides.Sh.chinensisNakaicontainedalotofpolysaccharides,buttheywerelessdistributed.Thecontentofpolysaccharidewasdifferentbetweenupanddownpositionofsamebreedsbamboo,andthecontentofunderplacewashigherthanthatoftheupside.

Keywords:bamboopolysaccharide;content;UV2VIS

随着人们生活水平的提高,回归自然、天然健康食品、绿色食品的概念越来越深入人们的生活理念,天然食品和药品已经成为国际食品和药品发展的潮

流和时尚。竹叶提取物作为一种天然的、具有多种生理功能的提取物正不断被人们所认识。

竹子是属于禾本科竹亚科(Bambusadea)的一类植物,全球约有70属,1225种。竹类植物分布于地球的北纬46°至南纬47°之间的热带,亚热带和暖温带地区[1-4],主要集中分布于亚洲、非洲、南北美洲、大洋洲的热带、亚热带地区及太平洋相应位置的岛屿,东南亚的热带、亚热带为其分布的中心地区。竹林面积以每年3%的速度增加,如何合理高效利用

　收稿日期:2008-09-27

　基金项目:国家“十一五”科技支撑项目(2006BAD19B0803)

竹林资源,推动竹产业的发展,已成为世界林业生产中一个高度关注的问题。我国是竹子中心产区之一,占世界竹林总面积的25%。开发利用竹类森林

资源意义十分重大。竹叶在我国具有悠久的食用和药用历史,竹叶性淡、微涩、寒,味甘、苦,主治烦热口渴,小儿发热,小儿疳积,热病不眠,口舌生疮,目赤肿痛,疥癣,疮毒,咽喉炎,外伤出血等症[5]。竹叶中含有大量的黄酮类化合物和生物活性多糖等有效成分,竹叶活性多糖通过增强免疫功能、促进免疫因子的生成和激活来实现抗肿瘤作用,具有良好的免疫调节、抗肿瘤、抗感染、抗炎症等多种功效。目前已受到国内外市场的广泛关注。日本人还从箬竹叶提

　作者简介:叶建中(1985-),男,硕士生;王成章(1966-),男,博士,研究员,主要从事天然产物的化学加工、保健产品及药物开发,通讯联系人,

wangczlhs@。

取分离得一种活性多糖,经实验证明对S-180有很好的抑制和清除效果。

为了提高竹叶活性组分的高效利用,本文通过建立竹叶多糖活性组分的含量检测方法,筛选高含量的竹叶品。

1　材料与仪器

111　材料与试剂

竹叶,阔叶箬竹、长叶苦竹、巴山木竹、毛竹、鹅毛竹、金丝慈竹、淡竹、绿竹、铺地竹、毛金竹竹叶等27种于2007—2008年分别采于南京林业大学竹园、南京林产化学研究所、福建尤溪、安徽池州,采集时选取不同属的竹子中较为典型、常见的种类,对于上下部位叶子老嫩程度有明显不同、容易分出的种类,则按上、下部位采集。采集后50℃烘干粉碎;试剂均为分析纯。112　主要仪器

722光栅分光光度计,上海第三分析仪器厂;旋转蒸发器,RE-5LC巩义市予华仪器设备有限公司。113　葡萄糖标准曲线制作11311　硫酸-蒽酮溶液配制

称取蒽酮012g,浓硫酸定容于100mL容量瓶中,混匀即可(现配现用)。11312　标准葡萄糖溶液的配制

精密称取干燥至恒重的无水葡萄糖配制成质量浓度为011200mg/mL的溶液,备用。11313　葡萄糖标准曲线绘制

精确吸取010、011、012、013、014、016、018mL于10mL具塞试管中,用蒸馏水补足1mL,以110mL蒸馏水做空白对照,然后各加入4mL硫酸-恩酮溶液,摇匀,放入冰水中冷却后置于沸水中煮沸10min,迅速冷却至室温,于620nm测定吸光度A。114　样品多糖重复测定实验

分别取4份相同质量(2g)经粉碎的绿竹叶粉置于回流烧瓶中,提取条件同为料液比1:30,温度80℃,提取3h,提取2次,合并提取液浓缩,定容于25mL容量瓶中,分别取1mL于10mL具塞试管中,以110mL蒸馏水做空白对照,然后各加入4mL硫酸-恩酮溶液,摇匀,放入冰水中冷却,然后置于沸水中煮沸10min,迅速冷却至室温,于620nm测定吸光度A。115　样品多糖加样回收率测定

配备0106mg/mL的绿竹叶多糖提取液,分别向10mL样品液中加入4、5、6mL的011200mg/mL的

葡萄糖标准溶液,定容于25mL容量瓶中,取1mL测定吸光值。每个实验号作3个点,共9点。116　样品多糖提取与测定

2g经粉碎的绿竹叶粉置于回流烧瓶中,提取条件同为料液比1:30,温度80℃,提取3h,提取2次,合并提取液浓缩,定容于25mL容量瓶中,分别取1mL于10mL具塞试管中,以110mL蒸馏水做空白对照,然后各加入4mL硫酸-恩酮溶液,摇匀,放入冰水中冷却,后置于沸水中煮沸10min,迅速冷却至室温,于620nm测定吸光度A。

2　结果与分析

211　紫外-比色法标准曲线的绘制

以葡萄糖含量c(mg)对吸光度A线性回归,得回归方程A=518137c-0100473(R=019987)。表明葡萄糖在010～9610μg/mL范围内与吸光度呈较好的线性关系。212　多糖重复测定实验

分别取4份相同绿竹叶多糖提取液,重复测定多糖的结果如表1。实验结果表明,以葡萄糖为标准品,610nm下比色测定竹叶多糖的方法可行,有较好的重复性。

表1　多糖测定重复性实验数据

编号

质量/g多糖含量/mg多糖相对含量/%相对标准偏差

121009987194137010099

2210409901141413210110881341394

210924

9011

4131

213　样品多糖加样回收率测定

各组中加入的竹叶多糖样品量为016mg,加入的葡萄糖标准品分别为0148、0160、0172mg。回收率分别为101192%、101168%、99189%,标准偏差为010110,符合要求,证明了该方法的可靠性。

表2　加样回收率实验数据

　编号123加入样品量/mg016001600160加入标准品量/mg014801600172测得多糖量/mg110892112101113192回收率/%101192

10116899189

平均回收率/%　101116相对标准偏差

010110

214　27个品种竹叶中多糖的含量测定

按照多糖测定方法,测定27个品种竹叶中多糖的含量,测定结果如表3。未标明年份的都为2007年采摘。

表3　不同品种竹叶中多糖含量

多糖质竹种

产地采摘时间

量分数/%

箬竹I1latifolius

南林大10月2166小叶箬竹(I.victorialisKengf.)南林大10月4109阔叶箬竹(tifolious(Keng)McClure)上南林大10月2133阔叶箬竹(tifolious(Keng)McClure)下南林大10月2158矮箬竹I.pedalis(Keng)Kengf.南林大10月4112髯毛箬竹I.barbatusMcClure

南林大

10月3138细叶箬竹

南林大

10月3143苦竹(Pl.amarus(Keng)Kengf.)上南林大10月2181苦竹(Pl.amarus(Keng)Kengf.)下南林大10月3121细叶苦竹

南林大10月3172长叶苦竹(Pl.chinaf.hisauchii)上南林大10月1194长叶苦竹(Pl.chinaf.hisauchii)下南林大10月3173巴山木竹(B.fargesiikengf.etYi)上南林大10月2177巴山木竹(B.fargesiikengf.etYi)下南林大10月4113鹅毛竹(Sh.chinensisNakai)

南林大10月5169铺地竹(SasaargenteastriatusE.G.Camus)南林大10月4169毛竹(Ph.edulis(Carr)A.etC.Riv)南林大10月4136靓竹(Sasaellaglabraf.albo-striata)南林大10月3177淡竹(Ph.glaucaMcClue)南林大10月2154百夹竹(Ph.nidulariaMunro)

南林大10月4136孝顺竹(B.multiplex(Lour.)Raeuschel南林大

10月

3109

　exJ.A.etJ.Schult)

唐竹(Sinobambusatootsik(Sieb.)Makino)南林大10月4130毛金竹(Ph.nigavar.henonisStapfet南林大

10月

3176

　Rendle)

金丝慈竹(N.affinis(Rendle)Kengf)上南林大10月3155金丝慈竹(N.affinis(Rendle)Kengf)下南林大10月4173水竹(PhyllostachysHeteroclataOliver)林化所4月3151淡竹(Ph.glaucaMcClue)尤溪4月2154绿竹(Dendrocauamopsisoldhami.尤溪

4月

4136

　(munro)Kengf)

毛竹(Ph.edulis(Carr)A.etC.Riv)尤溪4月4102苦竹(Pl.amarus(Keng)Kengf.)尤溪4月3135苦竹(Pl.amarus(Keng)Kengf.)池州08年3月3125毛竹(Ph.edulis(Carr)A.etC.Riv)

池州

08年3月

3190

由表3可知,多糖的质量分数为1194%～

5169%,即1914～5919mg/g,基本都在2%以上。

根据测定结果,按含多糖的高低将其分为质量分数在4%以上、3%～4%、2%～3%、2%以下4类。其中4%以上有:南京林业大学(表3中及以下简称

南林大)的鹅毛竹,小叶箬竹,矮箬竹,巴山木竹下,铺地竹,毛竹,百夹竹,唐竹,金丝慈竹下;福建尤溪的绿竹,毛竹;3%～4%有:南林大的髯毛箬竹,细叶箬竹,苦竹下,细叶苦竹,长叶苦竹下,靓竹,孝顺竹,毛金竹,金丝慈竹上;林化所的水竹;福建尤溪苦竹;安徽池州的苦竹,毛竹;2%～3%有:南林大的箬竹,阔叶箬竹上、下,苦竹上,巴山木竹上,淡竹;福建尤溪的淡竹;2%以下有:南林大的长叶苦竹上。南林大竹园中的毛竹、尤溪毛竹及池州毛竹多糖质量分数有所不同,分别为:4136%、4102%,3190%;3个地方的苦竹质量分数分别为:南林大上2181%,南林大下3121%,尤溪3135%,池州3125%。

由此多糖含量测定的数据可以大致为工业生产筛选适用竹叶原料,其中来源较广、含量较高的绿竹、毛竹为最佳原料,鹅毛竹含量特别高,但是分布较少。同品种的竹叶上、下部位多糖含量有所不同,且含量都是下部老叶高于上部嫩叶子。因而,多糖更多富集在下部老叶片中。

3　结论

(1)对不同品种竹叶多糖的含量进行了测定,得多糖质量分数在1194%～5169%,即1914～5619mg/g;

(2)来源较广、含量较高的绿竹,毛竹为提取竹叶多糖的最佳原料,鹅毛竹多糖含量特别高,但是分布较少。

(3)同品种的竹叶上下部位多糖含量有所不同,且含量都是下部老叶高于上部嫩叶子。因而,多糖更多富集在下部老叶片中。

参考文献

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