化学发光免疫分析技术

化学发光免疫分析陈仓医院检验科：

一、化学发光免疫技术的概念 二、化学发光免疫分析基本原理 三、化学发光免疫分析的类型 四、临床应用 五、发展与展望

一、化学发光免疫技术的概念化学发光免疫技术：化学发光分析是根据化学反应产生的辐射光 的强度来确定物质含量的分析方法。化学发光免疫分析是将化学发光 系统与免疫反应相结合，用化学发光相关的物质标记抗体或抗原，与 待测的抗原或抗体反应后，经过分离游离态的化学发光标记物，加入 化学发光系统的其它相关物产生化学发光，进行抗原或抗体的定量或

定性检测。

化学发光免疫分析 (Chemiluminescence Immunoassay,CLIA)是近十年来在世界范围内发展非常迅速的非放射性免疫分析。它 具有高灵敏度、检测范围宽、操作简便快速、标记物稳定性好、无污

染、仪器简单经济等优点。它是放射性免疫分析与普通酶免疫分析的取代者，是免疫分析重要的发展方向。CLIA发展迅猛，已占各种免疫 分析的首位，是目前放射免疫分析和酶联免疫分析最佳的取代者。

是目前世界公认先进的标记免疫测定技术，化学发光 免疫分析技术具有高度的准确性和特异性，成为检验方法 中最为重要的技术之一。化学发光免疫分析技术作为疾病 诊断的主要手段已被广泛用于机体免疫功能、传染性疾病 、内分泌功能、肿瘤标志物、性激素、甲状腺功能等方面 的体外诊断实验中。

化学发光免疫分析的优势 灵敏度高 灵敏度高是化学发光免疫分析关键的优越性，其灵敏度可达 10-22

mol/L ( RIA 为 10 -12 mol/L )。化学发光免疫分析能够检出放射免疫分析和酶联免疫分析等方法无法检出的物质，对疾病的早期诊断具有 十分重要的意义。 发光强度在 4 ~ 6 个量级之间与测定物质浓度间呈线性关系。这与显 色的酶免疫分析吸光度( OD 值)为 2.0 的范围相比，优势明显。虽 然 RIA 也有较宽的线性动力学范围，但放射性限制了其应用。

宽的线性动力学范围

光信号持续时间长 辉光型的 CLIA 产生的光信号持续时间可达数小时甚至一天。简化了实 验操作及测量。 绝大多数分析测定均为仅需加入一种试剂(或复合试剂)的一步模式

分析方法简便快速 结果稳定、误差小 样品系直接自己发光，不需要任何光源照射，免除了各种可能因素(光源稳定性、光 散射、光波选择器等)给分析带来的影响，使分析结果灵敏稳定可靠。

安全性好及使用期长 免除了使用放射性物质。到目前为止，还未发现其危害性；试剂稳定，保存期可达一 年。

二、化学发光免疫分析基本原理

化学发光免疫分析包含两个部分, 即免疫反应系统和化学 发光分析系统。免疫反应系统是将标记物质标记在抗原或 抗体上, 经过特异性免疫反应后,形成抗原2抗体复合物。 然后进行对标记物进行检测, 来测定待检物。化学发光分 析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧 化, 形成一个激发态的中间体, 当这种激发态中间体回到 稳定的基态时, 同时发射出光子, 利用发光信号测量仪器 光量子产率。

化学发光免疫分析仪是通过检测患者血清内待测物质从而 对人体进行免疫分析的医学检验仪器。将定量的患者血清 和辣根过氧化物(HRP)加入到固相包被有抗体的白色不 透明微孔板中，血清中的待测分子与辣根过氧化物酶的结 合物和固相载体上的抗体特异性结合。分离洗涤未反应的 游离成分。然后，加入鲁米诺Luminol发光底液 ，利用化 学反应释放的自由能激发中间体，从基态回到激发态，能 量以光子的形式释放。此时，将微孔板置入分析仪内，通 过仪器内部的三维传动系统，依次由光子计数器读出各孔 的光子数。样品中的待测分子浓度根据标准品建立的数学 模型进行定量分析。最后，打印数据报告，以辅助临床诊 断。

三、化学发光免疫分析的类型化学发光免疫分析法根据其标记物的不同可分为三大类, 即化直接化学发光免疫分析、化学发光酶免疫分析和电化 学发光免疫分析法。

3.1 直接化学发光免疫分析用吖啶酯直接标记抗体(抗原),与待测标本中相应的抗原(抗体)发生免疫反应后，形成固相包被抗

体-待测抗原-吖啶酯标记抗体复合物，这时只需加入氧化剂(H2O2)和NaOH使成碱性环境，吖啶酯在

不需要催化剂的情况下分解、发光 。由集光器和光电倍增管接收、记录单位时间内所产生

的光子能，这部分光的积分与待测抗原的量成正比，可从 标准曲线上计算出待测抗原的含量。

直接化学发光的机理--- 夹心法

磁微粒

抗体

+

被测抗原

+

带吖啶酯 标记物抗 体 (2) 加入碱 (pH>10)

(1) 加入H2O2 (pH<10)冲洗后

发光

磁微粒技术

磁微粒模式图特点

– 抗原和抗体结合与未结合 部分的易分离

Y

3.2、化学发光酶免疫分析化学发光酶免疫分析(chemiluminescence enzyme immunoassay,CLEIA)是用参与催化某一化学发光反应的酶 如辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(ALP)来标记抗原或抗 体，在与待测标本中相应的抗原(抗体)发生免疫反应后，形成 固相包被抗体-待测抗原-酶标记抗体复合物，经洗涤后，加入 底物(发光剂),酶催化和分解底物发光，由光量子阅读系统接 收，光电倍增管将光信号转变为电信号并加以放大，

再把它们 传送至计算机数据处理系统，计算出测定物的浓度。

㈠ 辣根过氧化物酶标记的化学发光免疫分析 该分析系统采用辣根过氧化物酶(HRP)标 记抗体(或抗原),在与反应体系中的待测标 本和固相载体发生免疫反应后，形成固相包 被抗体-待测抗原-酶(HRP)标记抗体复合 物，这时加入鲁米诺发光剂、H2O2和化学发 光增强剂使产生化学发光。

辣根过氧化物酶标记化学发光免疫分析示意图

㈡ 碱性磷酸酶标记的化学发光免疫分析该分析系统以碱性磷酸酶 标记抗体(或抗原), 在与反应体系中的待测标本和固相载体发生

免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-酶标记抗体复合物，这时加入AMPPD发光剂，

碱性磷酸酶使AMPPD脱去磷酸根基团而发光。

碱性磷酸酶标记化学发光免疫分析示意图

本文来源：https://www.bwwdw.com/article/0g8i.html