实验内容(实验1-4)

《种子质量检测与检疫》实验内容

实验一 种子净度分析（4学时）

一、实验目的

种子净度是指种子清洁干净的程度。通过净度测定，了解种子中净种子所占比例，也为测定其他项目如生活力、发芽率、千粒重等提供种子。 二、实验要求

识别净种子、其他植物种子和杂质，掌握种子净度的分析技术，并练习其他植物种子数目的测定方法和结果计算方法。 三、实验原理

种子净度测定就是将样品中净种子、杂质和其他植物种子区别开来，如何区分是种子净度测定的基础。目前国际上有精确法和快速法两种。我国目前以快速法作为国家标准。 四、实验材料和仪器

送验样品一份、检验桌、分样器、分样板、套筛、天平、小碟或小盘、镊子、小刮板、放大镜、木盘、小毛刷、电动筛选机、种子净度工作台等。 五、实验方法和步骤

1.送验样品的称重和重型混杂物的检查

（1）将送验样品倒在台秤上称重，得出送验样品重量M。

（2）将送验样品倒在光滑的木盘中，挑出重型混杂物，在天平上称重，得出重型混杂物的重量m，并将重型混杂物分别称出其他植物种子重量m1，杂质重量m2，m1与m2重量之和应该等于m。

2.试验样品的分取

（1）先将送验样品混匀，再用分样器分取试验样品一份，或半试样两份，试样或半试样的重量见有关章节。

（2）用天平称出试样或半试样的重量（按规定留取小数位数）。 3.试样的筛理与分析

（1）选用筛孔适当的两层套筛，要求小孔筛的孔径小于所分析的种子，而大孔筛的孔径大于所分析的种子。使用时将小孔筛套在大孔筛的下面，倒入（半）试样，加盖，置于电动筛选机上或手工筛动两分钟。

（2）筛理后将各层筛及底盒中的分离物分别倒在净度分析桌上进行分析鉴定，区分出净种子、杂质，并分别放入小碟内。 4.各种成分称重

将每份（半）试样的净种子、其他植物种子、杂质分别称重，其称量精确度与试样称重相同。其中，其他植物种子还应分种类计数。 5.结果计算与处理

（1）核查各成分的重量之和与样品原来的重量之差是否超过5%。

（2）计算净种子的百分率（P）、其他植物种子的百分率（OS）及杂质的百分率（I）：

先求出第一份（半）试样的P1、OS1、I1：

P1=（净种子重量÷各成分重量之和）×100 OS1=（其他植物种子重量÷各成分重量之和）×100 I1=（杂质重量÷各成分重量之和）×100

再用同样方法求出第二份（半）试样的P2、OS2、I2。

若为全试样，则各种组成的百分率应计算到一位小数，若为半试样，则各种成分的百分率计算到两位小数。

（3）求出两份（半）试样间3种成分的各平均百分率及重复间相应百分率差值，并核对容许差距，见《GB/T3543·3-1995》表二。 （4）各重型混杂物样品的最后换算结果的计算：

P2=P1×(M-m)/M OS2=OS1×（M-m）/M＋m1/M×100 I2=I1×(M-m)/M＋m2/M×100

其中P1、OS1、I1分别由分析两份（半）试样所得的净种子、其他植物种子的各平均百分率，而P2、OS2、I2分别为最后的净种子、其他植物种子及杂质的百分率，m1/M×100为最后混杂物中其他植物种子的百分率，m2/M×100为重型混杂物中杂质的百分率。

（5）百分率的修约 若原百分率取两位小数，则可经四舍五入保留一位。各成分的百分率相加应为100.0%，如为99.9%或100.1%，则在最大的百分率上加上或减去不足或超过之数。如果此修约值大于0.1%，则应该检查计算上有无差错。 6.其他植物种子数目的测定

（1）将取出（半）试样后剩余的送验样品按要求取出相应的数量或全部倒在检验桌上或样品盘内，逐数进行检查，找出所有的其他植物种子或指定种的种子并计出每个种的种子数，再加上（半）试样中相应的种子数。

（2）结果计算 可直接用找出的种子粒数来表示，也可折算为每单位试样重量（通常为每千克）内所含种子数来表示：

其他植物种子含量（粒数/kg）=其他植物种子粒数/送验样品的重量（g）×100 六、实验结果和数据处理

填写净度分析的结果报告单

净度分析的最后结果精确到1位小数，如果一种成分的百分率低于0.05%，则填为微量，如果一种成分结果为零，则须填报“-0.0-”。

表1 净度分析结果记载表 重型混杂物检查：M（送验样品）= （g）m（重型混杂物）= （g）m1= （g）m2= （g） 第一份 （半）试样 第二份 （半）试样 重量（g） 百分率（%） 重量（g） 百分净种子 其他植物种子 杂质 重量合计 样品原重 重量差值百分率 率（%） 百分率样间差值 平均百分率

表2 其他植物种子测定记载表 其他植物种子测定 试样重量： g 净度（半）试样Ⅰ中 净度（半）试样Ⅱ中 剩余部分中 合计 或折成每千克粒数 名称 粒数 其他植物种子种类和数目 名称

表3 净度分析结果报告单 样品编号—————— 作物名称： 学名： 成分 百分率 其他植物种子名称及数目或每千克含量（注明学名） 备注 七、思考题

1.种子净度分析的主要步骤有哪些？

2.对于种子净度分析的实验数据是如何分析和处理的？ 3.种子净度测定时有何注意事项？

净种子 其他植物种子 杂质 粒数 名称 粒数 名称 粒数 实验二 种子水分含量的测定（4学时）

一、实验目的

种子水分是影响种子寿命和安全贮藏的重要因素，是分级定价的重要指标。在种子收购、调运和贮藏期间都需要测定种子水分含量，以保证种子的安全贮藏和运输。本实验的目的就是让学生掌握测定种子水分常用方法的原理、步骤和注意事项。 二、实验要求

了解电烘箱的结构、原理及使用方法，掌握低恒温烘干法与高恒温烘干法测定水分的方法及操作技术，了解电阻式和电容式速测仪的构造、原理和使用方法。 三、实验材料、仪器和试剂

小麦、大豆、蔬菜等作物的种子、电热恒温鼓风干燥箱（电烘箱）、电脑水分测定仪、电容式水分测定仪、天平、样品盒、温度计、干燥器、干燥剂、电动种子粉碎机、广口瓶、坩埚钳、手套、角匙、毛笔等。 四、实验方法和步骤

1. 低恒温烘干法（103±2℃烘箱法）

（1）把电烘箱的温度调节到110～115℃进行预热，然后让其保持在103±2℃。

（2）把样品盒置于103±2℃烘箱中约一小时左右，放干燥器内冷却后用感量1/1000的天平称量，记下盒号和重量。

（3）把粉碎机调节到合适的细度，从送验样品中取出15～25g种子进行磨碎（禾谷类种子磨碎物至少50%通过0.5mm的铜丝筛，而留在1.0mm铜丝筛上的不超过10%；豆类种子需要粗磨，至少有磨碎成分通过4.0mm筛孔；棉花种子要进行切片处理；小粒种子不需要磨碎）。 （4）称取试样两份（放于预先烘干的样品盒内称重），每份4.5g～5.0g，并加盖。 （5）打开样品盒盖放于盒底，迅速放入电烘箱内（样品盒距温度计水银球2～2.5cm），待5～10min内温度回升至103±2℃时，开始计算时间。

（6）103±2℃烘干8h后，打开箱门，戴上手套迅速盖上盒盖（最好在箱内盖好），立即置于干燥器内冷却，经30～45min取出称重，并记录。 （7）结果计算：

水分%=（样品烘前重量-样品烘后重量）/样品烘前重量×100

若一个样品两次测定之间的容许差距不超过0.2%，则用两次测定的算术平均数表示，否则需要重新做两次测定。

2. 高恒温烘干法（130～133℃烘箱法） （1）把烘箱的温度调节到140～145℃。

（2）样品盒的准备，样品的磨碎，称取样品等与103±2℃烘箱法相同。

（3）把盛有样品的称量盒的盖子置于盒底，迅速放入烘箱内，此时箱内温度很快下降，在5～10min内回升到130℃时，开始计算时间，保持130～133℃，不超过±2℃，烘干1h。ISTA规程烘干时间为：玉米4h，其他禾谷类2h，其他作物种子1h。

（4）到达时间后取出，将盒盖盖好，迅速放入干燥器内，经15～20min冷却，然后称重，记下结果。

（5）结果计算方法同上。

3. LDS系列电脑水分电脑快速测定仪法 （1）测量准备

取出传感器周围的泡沫块，如果不取出则不能正常测量。

取出手柄（即电池盒），把四节5号干电池装入电池盒内，然后压下电池，装入仪器中。 将漏斗套在落料筒上。 将仪器放在没有振动的平台上。 将待测量样品进行初步筛选，去掉杂物。

查表选择品种代号，使用时直接查品种代号即可直接测量。 （2）水分测量

按一下电源开关，仪器自检后显示品种号。 按△或▽键选择测量品种代号。

将测量样品放入落料筒至漏斗下沿口平待用。

将落料筒放于仪器传感器上，左手扶住落料筒，右手轻按落料开关，使样品全部均匀落进测量传感器，小数点闪动数次后显示水分值。

在显示水分值时，按一次“确认”键可显示样品重量，这时按一下“品种”键则可显示待测品种温度，再按一次“品种”键可显示干电池的电压值，再按“确认”键则回到水分显示。

关上落料筒的料门，倒出传感器内的样品，准备下一次的测量。 （3）误差修正

确定修正值：一般应以105℃标准烘箱法测得的水分为标准，与测量值相减，即为修正值。如水分仪测量出的水分值为9.6%，而需要显示的实际水分值为10.0%，则该品种应提高0.4，修正值即为0.4。反之则为负数。

进入修正状态：倒出仪器内的样品，长按住“品种”键不放，待显示数开始闪烁后松开，仪器显示屏左下角红色指示灯亮，同时仪器显示出厂时设定的默认修正值为“0.0”，指示仪器已进入修正状态。

修正：按“△”键将修正值提高0.4，然后按“确认”键保存，仪器将闪烁确认修正完成，按“品种”键或关机退出修正状态。 （4）定标

制备标准样品：用105℃标准烘箱法制备高、中、低三个标准样品。

进入定标状态：倒出仪器中的样品，长按住“确认”键不放，待显示数开始闪烁时松开，仪器显示屏左下角红色指示灯亮，同时显示品种代号，指示仪器已进入定标状态。

选出品种代号：按“▽”或“△”键盘选择品种代号。

注意定标顺序：定标时应按照先低水分，再高水分，最后中间水分的顺序进行。 标定低水分：取低水分的标样放入传感器，等待仪器显示测量结果，将测量结果修改为修正值，然后按住“确认”键直至数字开始闪烁后松开，一点定标完成。

标定高水分：倒出样品，不要关机，再取高水分标准样品放入传感器，等待仪器显示测量结果，将测量结果修改到标准值，然后按住“确认”键直至数字开始闪烁后松开，二点定标已经完成。

复测标样：复测标准样品，测量误差≤0.5%即表示定标成功，关机退出定标状态。如果误差过大，则需要重新定标。

标定第三点：如果高低水分样品的差距较大，可用中间水分进行第三点定标，方法与定低（或高）水分样品相同。

4. PM4115型电脑水分测定仪（电容式） （1）直接测定法

①接通电源：按“开关”键打开电源。

②选择品种：按“选择”键，每按一次，品种编号将增加一个。品种编号12以后会回复到1。

③将样品装入自动料斗：在自动料斗上部套上料斗，倒入样品直至样品从自动料斗中溢出。不要一下子倒光，要缓慢均匀倒入。水平移开料斗，刮掉多余样品，使其为平满的一杯。 ④安装台座和自动料斗：将自动料斗的台座安装在本测定仪上，使定位槽朝前。对准台座的定位槽，将自动料斗安装到台座上。 ⑤测定：按“测定”键，小数点闪烁显示。

⑥倒掉样品：将自动料斗的闸门向前拉到关闭，把底部恢复成原样，从测定仪上卸下自动料斗和台座。倒掉样品，此时水分值显示保持不变。继续测定时，请从步骤③开始。 ⑦花生仁的测定：将料斗套在样品杯上，在5～6秒内均匀投入样品，直到样品从样品杯溢出为止。水平移开料斗，刮掉多余样品，使其为平满的一杯。

按几次“选择”键，使品种名称显示为“8 PEAN”花生仁。按”测定“键，小数点闪烁显示。“POUR”闪烁后开始倒入样品，“POUR”消失，小数点闪烁4次后，显示水分值和测定次数。

⑧倒掉样品：此时水分值保持不变。连续测定时，请从步骤③开始。 （2）平均值的显示

按“平均”键后显示平均值：测定次数在2～9次时，会显示“AVE”，测定次数和平均值。，再按“平均”键后下一次测定水分时的测定显示次数将从1开始。 （3）水分值修正方法

各品种的水分值可在－9.9%＋9.9%的范围内进行修正。

①设定为修正值输入模式：请确认电源已经关闭，按“开关“键，在显示型号和其他内容的期间内，连续按“选择”键，直至所有显示都消失，出现“BIAS”、修正值、“%”显示，修正值的初始值为0。

②选择品种：按“选择”键，每按一次“选择”键，品种编号将增加一个。

③修正值输入：增加修正值时，请按“测定”键，每按一次增加0.1%；减少修正值时，请按“平均”键，每按一次减少0.1%。 ④切断电源：按“开关”键，可以切断电源。 五、实验结果及数据处理 根据实验结果填写下表：

表1 种子水分测定标准法记载表 测定方作物 样品 称重盒试样（g） 试样加盒重 烘失水分 法 低恒温烘干法 1 2 平均 1 2 平均 重（g）

烘前 烘后 g % 高恒温烘干法 表2 种子水分电子仪器速测法记载表 测定方法 PM4115型 作物编号 1 2 3 平均 LDS型 六、思考题

1.试述测定种子水分各种方法的原理和步骤。 2.试述烘干法种子水分测定时有何注意事项。

实验三 种子发芽试验（4学时）

一、实验目的

种子是有生命的生产资料，种子发芽力的高低是决定种子质量的重要指标之一。因此，正确测定种子发芽力是一项重要的应用技术。本实验旨在让学生掌握标准发芽试验方法。 二、实验要求

掌握主要禾谷类和单子叶植物种子小麦、玉米等种子的标准发芽技术规定、发芽方法、幼苗鉴定标准和结果计算方法，掌握主要豆类和蔬菜种子的发芽技术规定、发芽方法、幼苗鉴定标准和结果计算方法。 三、实验原理

水分、温度和空气是种子萌发的必需条件，对于某些作物的种子来说还需要光照或黑暗条件。不同作物由于长期系统发育的影响，使得其种子形成了各自不同的萌发特性，即不同作物萌发所需条件各有差异。因此在进行种子发芽试验时，必须根据作物种类、籽粒大小、种子的化学成分以及发芽床的保水供水性能等，选择适宜的发芽床，控制与供试种子相适应的发芽条件，以获得能代表种子质量状况的发芽试验结果。 四、验材料和仪器

小麦、玉米等单子叶植物种子、大豆等双子叶植物种子、发芽盒、培养皿、发芽纸、消毒砂、智能人工气候箱等。 五、实验方法和步骤

（1）玉米种子发芽方法 玉米种子发芽技术规定（BP.S，20～30℃，25℃，4d，5d）采用砂床，经消毒，调节到适宜的湿度，装入长方形塑料培养皿，厚度2～3cm，然后播入50粒种子，再盖上1.5～2cm湿砂，盖好盖子，放入规定温度和光下培养。第四天计数正常幼苗，第七天计数正常幼苗、不正常幼苗和死种子数。

注：玉米属于子叶留土型发芽的单子叶植物。幼苗鉴定标准属于（ISTA，幼苗鉴定手册A1.2，A3.2组）。

①正常幼苗条件（幼苗的全部主要构造均应正常）：

根系 初生根完整或带有轻微缺陷，如褪色、有坏死斑点、开裂已愈合。若初生根有缺陷，而次生根正常，并有足够的数目。

幼芽 中胚轴完整，或带有轻微缺陷，如褪色、有坏死斑点、破裂已愈合、稍有弯曲。 芽鞘 完整或带有轻微缺陷，如褪色、有坏死斑点、稍有弯曲、顶端开裂少于三分之一或等于三分之一，不分离开。

叶片 完整，近芽鞘顶端伸出，至少达一半长度，或有轻微缺陷，如褪色、有坏死斑点、轻微损伤。

②不正常幼苗（幼苗带有一个或数个主要构造有缺陷，或正常发育受影响）：

根系 初生根有缺陷或无机能或次生根缺失，如发育不良、停滞、障碍、缺失、破裂、从顶端开裂、收缩、纤细、负向生长、玻璃状、由初生感染引起的糜烂。

幼芽 中胚轴有缺陷，如破裂、形成环状、螺旋形、严重卷曲、由初生感染引起的糜烂。 芽鞘 有缺陷，如畸形、破裂、顶端损伤、缺失、形成环状或螺旋形、严重卷曲和弯曲、从顶端开裂、并通过总长度的三分之一、并与主轴分离、基部开裂、纤细、由初生感染引起

的糜烂。

叶片 有缺陷，叶片不到芽鞘长度的一半，或缺失、弯曲及其他畸形。

幼苗 一个或数个主要构造有缺陷，或正常发育受影响，或整株有如下缺陷：畸形、黄化或白化、纤细、玻璃状、两株连生在一起、由初生感染引起的糜烂、先长芽鞘、尔后长根。 （2）小麦种子发芽方法 小麦种子发芽技术规定（TP.BP.S，20℃，4d，8d，预先加热30～35℃，预先冷冻5～10℃，3～7d，500×10GA3）。

采用纸卷发芽，先将发芽纸巾（36cm×28cm）预湿、拧干，用两层垫，平铺在工作台上，编号，然后播上100粒种子，再覆盖上一层湿纸巾，左边折起2cm宽，卷成松的纸巾卷，垂直竖在透明塑料盒中，4次重复，套上透明塑料袋，放入智能人工气候箱20℃发芽。如新收获的有休眠种子，须放在5～10℃条件下预先冷冻处理5d后，再放在20℃条件下发芽（预先冷冻处理时间不计发芽时间）。至第四天计数正常幼苗种子数，第八天计数正常幼苗、不正常幼苗和死种子数。

注：小麦和大麦均为子叶留土型发芽的单子叶植物。幼苗鉴定标准同属于一组（ISTA幼苗鉴定手册A1.2，3.3组。

①正常幼苗（全部主要构造均应正常）：

根系 至少有两条种子根完整或一条强壮的种子根，或仅有轻微缺陷，如褪色、有坏死斑点。

幼芽 中胚轴完整，或仅有轻微缺陷，如褪色、有坏死斑点。

芽鞘 完整，或仅有轻微缺陷，如褪色、有坏死斑点、稍有弯曲、从顶端开裂少于三分之一或等于三分之一。

叶片 完整，从芽鞘顶端长出，至少达其长度的二分之一，或带有如下轻微缺陷：褪色、有坏死斑点、稍有损伤。

②不正常幼苗（有一个或数个主要构造不正常，或发育受阻，幼苗有缺陷，如畸形、两株连生在一起、黄化或白化、纤细、玻璃状、由初生感染引起的糜烂等）：

根系 种子根有缺陷，或无功能，如发育不良、停滞、仅有一条细弱种子根、破裂、收缩、纤细、负向生长、玻璃状、由初生感染引起的糜烂。

幼芽 中胚轴有缺陷，如破裂、由初生感染引起的糜烂。

芽鞘 有缺陷，如畸形、由植物中毒引起的缩短、变粗、破损、残缺、形成环状、螺旋形、严重弯曲、卷曲、从顶端开裂大于其总长的三分之一、基部开裂、纤细、由初生感染引起的糜烂。

叶片 有缺陷、如长度不到芽鞘的一半、无叶、破裂或其他畸形等。

（3）大豆种子发芽方法 大豆种子发芽技术规定（BP.S,20～30℃,25℃,5d，8d，计数） ①正常幼苗（全部主要构造均应正常）：

根系 初生根完整，或仅有轻微缺陷，如褪色、有坏死斑点，破裂不深且已愈合。如初生根有缺陷，但次生根发育良好。

幼芽 上胚轴和下胚轴完整，或仅有轻微缺陷，或无功能组织小于50%，有三片子叶。 子叶 完整，或仅有轻微缺陷，如无功能面积小于50%，有三片子叶。 初生叶 完整，或仅有轻微缺陷，如无功能面积小于50%，有三片子叶。

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②不正常幼苗（有一个或数个主要构造不正常，或发育受阻，如畸形、破裂、先长子叶后长根、两株苗连生在一起等、黄化或白化、纤细、玻璃状、由初生感染引起的糜烂等）：

根系 初生根有缺陷，或无功能，如发育不良、停滞、破裂、顶端开裂、收缩、纤细、负向生长、玻璃状、由初生感染引起的糜烂。

幼芽 下胚轴或上胚轴有缺陷，如破裂、由初生感染引起的糜烂。 子叶 有缺陷、或无功能组织超过50%。 初生叶 有缺陷、或无功能组织超过50%。 顶芽 有缺陷或残缺。

（4）水稻种子发芽方法 水稻种子发芽技术规定（TP,BP,S,20～30℃,25℃,5d～14d，新收获的休眠种子须预先加热50℃,3d～5d，或0.1mol/LHNO3浸种24h）。本试验用方形透明塑料培养皿，垫入两层预先浸湿的发芽纸，每皿播入100粒种子，4次重复，放入规定温度和光下培养，第五天计数正常发芽种子数，第十天计数正常发芽种子数，第十四天计数正常发芽种子数、不正常发芽种子数和死种子数。

（5）洋葱种子发芽技术方法 洋葱种子发芽技术规定（TP,BP,20℃,15℃,6d，12d，新收获的休眠种子须预先冷冻5℃,3d）。

采用9cm玻璃培养皿纸床，将预先浸透的发芽纸两层，垫入培养皿内，数种置床，每皿100粒种子，重复四次，20℃条件下发芽。第六天计数正常发芽种子数，第九天计数正常发芽种子数，第十二天计数正常发芽种子数、不正常发芽种子数和死种子数。

①正常幼苗（全部主要构造均应正常）：

根系 初生根完整或仅有轻微缺陷，如褪色、有坏死斑点。

幼芽 子叶完整，带有一个向上的膝，或仅有轻微缺陷，如褪色、有坏死斑点。 ②不正常幼苗（有一个或几个主要构造不正常，或正常发育受阻或缺陷，如畸形、破碎、两株苗连生在一起等、黄化或白化、纤细、玻璃状、由初生感染引起的糜烂）：

根系 初生根有缺陷，如发育迟缓、残缺、停滞、破裂、从顶端开裂、收缩、纤细、负向生长、玻璃状、由初生感染引起的糜烂。

幼芽 子叶有缺陷，如缩短、变粗、破裂、收缩、弯曲、形成环状、螺旋状、无膝、纤细、玻璃状、由初生感染引起的糜烂。

（6）辣椒种子发芽方法 辣椒种子发芽技术规定（TP,BP,S，20～30℃,7d，14d，新收获的休眠种子须用0.2%的KNO3湿润发芽床）。

采用9cm玻璃培养皿纸床，将两层经0.2%KNO3浸透的发芽纸垫入培养皿，数种置床，每皿100粒种子，四次重复，放入20～30℃变温发芽，第七天计数正常发芽种子数，第十天计数正常发芽种子数，第十四天计数正常发芽种子数、不正常发芽种子数和死种子数。

①正常幼苗：

根系 初生根完整或仅有轻微缺陷，如变色或带有枯斑、或有浅度裂缝。

茎轴系统 下胚轴完整或仅有轻微缺陷，如变色或有枯斑、有轻微的损伤或裂缝，或有松散扭曲。

子叶 完整或仅有轻微缺陷，如无功能子叶部分少于50%，或有三片子叶、顶芽完整 幼苗 所有主要构造正常。

②不正常幼苗：

根系 初生根有缺陷，如生长受阻或残缺、发育不良、破损、从根尖有裂口、萎缩、很纤细、缩陷在种皮内、负向生长、水肿状、由初生感染引起的糜烂。如果初生根有缺陷，即使产生了次生根，仍为不正常幼苗。

茎轴系统 下胚轴有缺陷，如缩短变粗或缺失、深度破损或有裂缝、裂口穿透胚轴、过度弯曲或形成环状、紧度扭曲或形成螺旋状、极度纤细、水肿状、由初生感染引起的糜烂。

子叶 有缺陷，已有50%以上的组织没有正常功能，如肿胀性卷曲或畸形、分离或缺失、变色或坏死、水肿状、由初生感染引起的糜烂、顶芽或周围组织有缺陷。

（7）甘蓝种子发芽方法 甘蓝种子发芽技术规定（TP,20～30℃,20℃，5d，10d，新收获的休眠种子须在5℃预先冷冻3～5d，或用0.2%的KNO3湿润发芽床）。

采用9cm玻璃培养皿纸床，每皿垫入两层浸湿的发芽纸，数种置床，每皿100粒种子，四次重复，放入20～30℃变温或20℃培养，第五天计数正常发芽种子数，第十天计数正常发芽种子数、不正常发芽种子数和死种子数。

①正常幼苗（全部主要构造均应正常）：

根系 初生根完整或仅有轻微缺陷，如褪色、有坏死斑点、破裂不深且已愈合。 幼芽 下胚轴完整或仅有轻微缺陷，如褪色、有坏死斑点、破裂斑点且已愈合、稍有弯曲。

子叶 完整或仅有轻微缺陷，无功能组织少于50%，有三片子叶。 顶芽 完整。

②不正常幼苗（有一个或几个主要构造不正常，正常发育受阻，或整个幼苗有缺陷，如畸形、破碎、先长子叶后长根、两株连生在一起、黄化或白化、纤细、玻璃状、由初生感染引起的糜烂）：

根系 初生根有缺陷，如发育迟缓、短小、破损、从顶端撕裂、收缩、纤细、卷缩在种皮里、负向生长、玻璃状、由初生感染引起的糜烂、即使有次生根存在，也应划分为不正常幼苗。

幼芽 下胚轴有缺陷，如缩短、变粗或残缺、深度破裂、中心撕裂、收缩、弯曲、形成环状、严重弯曲、形成螺旋状、纤细、玻璃状、由初生感染引起的糜烂。

子叶 其缺陷已扩散到无功能组织50%以上、如肿胀、卷曲或其他畸形、损伤、分离、残缺、褪色、有坏死斑点、玻璃状、由初生感染引起的糜烂。

顶端或其周围组织 有缺陷。

（8）西瓜种子发芽方法 西瓜种子发芽技术规定（BP,S，20～30℃,25℃，5d，14d，要求低湿）。

采用纸巾卷发芽，先将纸巾卷浸湿，拧干，再用干纸吸去多余水分，达到低湿的要求，取两层平铺在工作台上，编号，摆放平整，数取50粒种子置床，盖上一层湿发芽纸，左边折2cm，卷成松的纸卷，垂直竖在透明塑料盒中，套上透明塑料袋，放在25℃光下发芽，第五天打开纸卷计数正常发芽种子数，拿去、记录，未发芽种子卷回继续发芽，第十天再检查一次，到第十四天打开纸卷，计数正常、不正常和死种子数。

①正常幼苗（幼苗全部主要构造均应正常）：

根系 初生根完整或仅有轻微缺陷，如褪色、有坏死斑点、破裂不深且已愈合、如初生根有缺陷、但次生根发育正常、且有足够的数目。

幼芽 下胚轴完整或仅有轻微缺陷，如褪色、有坏死斑点、破裂不深且已愈合、稍有弯曲。

子叶 完整或仅有轻微缺陷，如有功能组织大于50%，有三片子叶。 顶芽 完整。

②不正常幼苗（有一个或几个主要构造不正常、或正常发育受阻，整个幼苗有如下缺陷：畸形、破碎、先长子叶后长根、两株连生在一起、黄化或白化、纤细、玻璃状、由初生感染引起的糜烂）：

根系 初生根有缺陷和无功能次生根或残缺，如发育不良、停滞、残缺、破裂、从顶端破裂、收缩、卷曲、纤细、卷缩在种皮内、负向生长、玻璃状、由初生感染引起的糜烂。

幼芽 下胚轴有缺陷，如缩短、变粗或残缺、深度开裂、中心撕裂、收缩、卷曲、形成环状、紧密卷曲或螺旋形、纤细、玻璃状、由初生感染引起的糜烂。

子叶 有缺陷，无功能组织已扩散到50%以上，如肿胀、卷曲、畸形、分脱、残缺、褪色、有坏死组织、玻璃状、由初生感染引起的糜烂。

顶芽或其周围已损伤或糜烂。 六、实验结果

根据测定结果填写实验报告。

表1 种子发芽试验记载表 试验编号 作物名称 发芽前处理 记载日 合计 试验结果 正 硬 新 不 死 合计 记载天 发芽床 品种名称 发芽温度 重复 置床日期 年 月 日 每重复置床种子数 持续时间 期 数 正 硬 正 硬 新 不 死 新 不 死 正 硬 新 不 死 正 硬 新 不 死 正常幼苗 % 硬实种子 % 新鲜未发芽 % 不正常幼苗 % 死种子 % 附加说明： 七、思考题

1.试述小麦种子的发芽技术方法。 2.试述玉米种子的发芽技术方法。 3.试述大豆种子的发芽试验方法。 4.试述水稻种子的发芽试验方法。

实验四 种子生活力的测定（4学时）

一、实验目的

种子生活力是指种子发芽的潜在能力或种胚具有的生命力。可以通过发芽试验方法了解种子有无生活力，为正确评定种子质量提供依据。本实验的目的是让学生掌握化学快速测定种子生活力的原理、方法和鉴定标准。 二、实验要求

掌握四唑染色测定种子生活力所需试剂和测定原理，掌握主要种子种类四唑染色测定种子生活力的方法和判别有无生活力的鉴定标准。了解MTB法和红墨水法测定种子生活力的原理和鉴定标准。 三、实验原理

四唑染色测定的原理：种子活细胞里发生的还原反应通过一种指示剂的还原作用而显现出来。所用的指示剂是一种可被种子组织吸收的四唑盐类无色溶液，它在种子组织里面参与活细胞的还原过程，从脱氢酶接受氢离子，使氯化（或溴化）三苯基四氯唑经过氢化作用，在活细胞里产生红色、稳定、不扩散的TTCH。这样就可以根据四唑染成的颜色和部位，区分种子红色的有活力部位和无色的死亡部位。除了完全染色的有活力种子和完全不染色的无活力种子外，还可能出现一些部分染色的异常颜色或不染色的坏死组织。种子有无活力主要取决于胚和（或）胚乳（或配子体）坏死组织的部位和面积大小，而不一定在于颜色的深浅。根据颜色的差异主要是将健全的、衰弱的和死亡的组织鉴别出来，并确定其染色部位。

BTB法的测定原理：有活力种子的活细胞有呼吸作用，吸收空气中的氧气，放出二氧化碳，二氧化碳溶于水变成碳酸，碳酸解离成HHCO,使得种胚周围酸度增加。用BTB做指示剂来测定酸度的改变。BTB的变色范围为PH值6.0～7.6，酸性呈黄色，碱性呈蓝色，中间经过绿色。因此，活种子周围是黄色晕圈，而无生命力的种子则无此反应。

红墨水法的测定原理：活细胞的原生质膜具有选择吸收能力，而死亡的种胚细胞原生质膜丧失这种能力，于是染料就能进入死细胞而染色。 四、实验材料和仪器试剂

小麦、玉米、大豆、番茄、黄瓜等不同作物的种子、天平、玻璃培养皿、发芽纸或滤纸、烧杯、尺子、毛巾、冰箱、智能人工气候箱、培养箱、定量加样器、镊子、放大镜、解剖针、刀片、吸水纸、2，3，5-氯化三苯基四氯唑、磷酸缓冲液、乳酸苯酚透明剂、过氧化氢、硫酸钾铝、琼脂凝胶、氨水、红墨水、酸度计、低温低湿储藏箱等。 五、实验方法和步骤 （一）四唑染色测定方法

1.小麦、玉米种子四唑染色测定 取种子样品200粒，放入水中30℃条件下3～4h，或纸间12h，沿胚纵切，浸入0.1%四唑溶液中。35℃条件下0.5～1h。凡是胚的主要构造染成正常鲜红色，或盾片上下任一端三分之一不染色的（小麦胚根大部不染色，但不定根原基染色），为有活力种子。如盾片中央不染色，表明已受热损伤，作为无生活力种子。

2.大豆种子四唑染色测定 取大豆种子样品200粒，放在湿毛巾间预湿12h，一般需剥去种皮，然后浸入1%四唑溶液，35℃条件下2～3h，凡是整个种子染色正常明亮鲜红，或仅胚根

＋

3－

尖端二分之一不染色，或子叶顶端（离胚芽端）二分之一不染色的即为有活力种子。 3.番茄种子四唑染色测定 取样200粒种子，放湿纸间30℃条件下预湿12h，然后在种子中心刺破种皮和胚乳，浸入0.2%四唑溶液，在35℃条件下染色反应0.5～1.5h。凡是胚和胚乳全部染色的，为有活力种子。

4.黄瓜和西瓜种子四唑染色测定 取种子样品200粒，浸入水中，30℃条件下6～8h，可纵切一半，或剥去种皮（因西瓜种子表面滑溜可用软布揩擦或用5%硫酸钾铝硬化液处理，然后进行上述样品准备）。浸入1%四唑溶液35℃条件下2～3h。凡是整个胚染成鲜红色，或仅胚根尖端二分之一不染色，或仅子叶顶端二分之一不染色的为有活力种子。

5.棉花种子四唑染色测定 取种子样品200粒，放纸间预湿，30℃条件下12h，纵切一半种子，或剥去种皮，浸入05.%的四唑溶液，染色反应2～3h。凡是整个种子染成明亮红色，或仅胚根尖端三分之一不染色，或子叶表面有小范围坏死，或子叶顶端三分之一不染色，为有活力种子。

6.洋葱种子四唑染色测定 取种子样品200粒，放在湿纸间30℃条件下预湿12h，沿扁平面切去种子上面，露出胚体，放入0.2%四唑溶液0.5～1.5h。凡是种胚和胚乳全部染成鲜红色，或仅少量不与胚相连的胚乳不染色的，为有活力种子。

7.黑麦草种子四唑染色测定 取200粒种子，先用0.3%过氧化氢溶液浸种3～4h，或清水浸种6～18h，靠近胚横切去上大半粒种子，将带有胚一端种子浸入0.1%四唑溶液，30℃条件下6～24h，倒去四唑溶液，并吸去残液，滴入乳酸苯酚液，35℃条件下30分钟。凡是胚全部染成红色，或仅胚根尖端三分之二不染色的，为有活力种子。 （二）BTB法测定方法

配制1%的琼脂凝胶，内含0.1%BTB，用稀氨水溶液数滴调溶液颜色为蓝绿色或蓝色。趁热倒入数个培养皿中，使其摊成均匀的薄层，冷却凝固之前取吸胀的种子100粒，两次重复，整齐的将胚向下于凝胶中，或者平放种子，间距至少1cm。将培养皿加盖置于30～35℃下培养2～4h后，在蓝色背景下观察，如果种胚周围出现较深黄色晕圈是活种子，否则是死种子。 （三）红墨水法测定方法

取吸胀的种子100粒，两次重复，沿种胚中线切为两半，将一半置于培养皿中，加入5%的红墨水（以淹没种子为宜），染色5～10分钟。倒去红墨水液，用水冲洗多次至冲洗液无色为止。凡是种胚不着色的为有活力种子。 六、实验结果及数据处理

计算各种活力测定结果，评定不同种子批的生活力差异， 七、思考题

1. 分析不同生活力测定方法的生产意义。 2. 比较不同测定方法结果的差异，并分析原因。 3. 分析染色不正常无生活力种子的类型及其原因。

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