E-花环法测定三种中药水提物的免疫活性

维普资 h讯ttp://wwwcqvip.c.om第2 4誊第2期 20 0 年56月 大连轻工业 院学报学 J ou n arl o f aDl i an I n s ti t ut e o f iL h tg Ind u s t r yV01 . 42No .. 2

Ju n 2 . 0 0 5

章文编号： 1 00 5 . 0 4 1{42 0 50) 0 2 - 0 10 3 3 0

E .花环测法定三种中药水提的物免疫活性。叶云生，张苓花， 王吉(运大连轻工业学 院生物食与品程工学院，宁大辽连 1 16 304 )

关词键：E 花环实验 T:巴细淋胞；免疫性；活龙地提水物摘要：采用淋T巴细的 E胞-花环验，实测了地龙检水提物蒲公、英水提、物黄芩水物提免的活性疫结果。表明地龙水物提免疫活性高最，在度浓 2 0 0￣为 gu/m时，LE一花环平均增长到 1达9%而；蒲公英提水物在浓度 2为0 g/ mL时 E,花.平环均增达到长 13;%芩黄水提物在 浓度为 0/ z g4/m时L, .E环花均增长平达到7。%中图分号类 R: 39 2 . 3 3

文标识献码：A Im u nm o o cmp et ecne of a q e u o su x t r e c ta f or t h e r e k ind s of hi nCe s e tra d i ti no l ame d i ci ne s d e etc t e by d.Er o s t e e t et s tY E uY—n sh e gn, ZHAGN iL ng - uh,aW AGN Y un- j i S(c h o ol o f i o lBo gic a l& o Fod stu f fEn gi ne er i n g,D al i a n I sn i ttu t e o f L ig h t n I uds tr y,D al ia n 1 1 6 0 34, C i hn a )e y K w rod s E— r o s: t e te t est T—;l y mph o c y te; i mmu o nco mp e e tn ec; a qu e o u s e xt r ca t o f e ar t hw rom b A st r ac t: Th si p ap re r epo t r s t he i mm un o c

o mpe t e cn r ees e a r ch o f t h e q ua o u s e e tx r ac t s r f om e r a h towr, mS c ut e l l a r i a aB c i al ne sy s,a n d t a a rx c u a dm e tec t d e r e sp ec t i ve ly by E— ors et t e t S te. I t er ev als ht a t t eh a q euo u s

e x t rac to ef rat h owr m e xh i bi t s th e be s t imm u o nco pme et nc e .h Te E— ors et te c o nc en t ra t o ni a p rpo a c he s 1% 9i n av rea g e wit h 20 0/￣g/ m L fo e r at ho r wm ex t arc t in c on c e nt r a t io n. 1% i 3 n av er ag e w t ih 2￣ g/ 0Lm o f ta r a x -

a u mc e x tr a tc . an d 7% i n ave r ga e iwt h 40￣/g/ m L of S c ut e l l ar i a B i a ca le n s y se xtr act .地龙、蒲公英、 黄芩为作 3种重要的 传统中药原料，在临床 有上广泛的应用。 地龙或复其方治疗 细菌病毒感性染疾病以及于易并发感染严的重的皮肤烧烫伤效 显果著结合，其对某些肿瘤以及一胞( SR B C)受体简，称 E受为体 使外周，血淋巴细胞可与S R B C形成玫瑰花结【 0 。引T淋巴胞细 E一 环花形成 实验是作为间接评价 T淋巴细 胞能功的法方之，一具有把提淋高巴细胞E一花环 形成能力的物质视为能增强免疫功的能物 质。周外淋血巴细胞细经 4胞5℃加热 1或h用酶胰处可脱理些免相疫关疾性病难治性微小病如变病肾、特

发血小性减少性板紫瘫、系统性红斑狼 疮著显的 疗效一，般认为地 对龙机体免疫功能具 有节作调用。小云等唐 2在 0 2年证0实 地肽龙能够提高 T淋巴细胞一花E环成花率、淋巴细

胞转化率及增强KN ( a t unr l a k i ll re ec l1 )细胞活…性。加味 四子君

去受体E【5, 6。脱 E J受体的 T淋巴 胞在适当的条件下细能重新成合 E受体。此可用因脱E受体淋巴细的胞的E.花 环验实来初步 检药测物 免的疫 性。活前目已用脱E受体的淋 巴细胞的E一花 实验环检测其活 的制品有性转因子移胸，腺 等肽J。本文作者把 E 花一环法用 这于3种中药 水物提中，来检这些测药的免物疫性活。

散以公英蒲为要主分之成一，已有实验证实能够显著提高雏 鸡自的细胞总数 、淋 T巴细胞百分 、率 DN .HI抗效体和价中嗜性白细的胞吞指噬数，能较大幅度高雏提鸡新城疫抗体平水能够、显著增免加疫器官的质等。量学高军等于 1 99年9证实黄芩 糖多引能起继发性鸡红细胞免疫 功能增_强 2 J。动物外周血 巴淋细胞表面具 绵有红羊细

1材料和方法 1 . 1材料

龙水提物、地黄芩水提物、蒲英公水提，物由*

收日期稿：2 0 0 5— 0 3—0 9

作者简 介：云叶生(1 9 8 0~ ),男，硕研究士生

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l 0 4大连轻 工业学 院学 报

第 2 4卷

本验实提供室新鲜；绵血羊，液由连大医科 大附学属第一院提医供，无菌绵从颈羊脉静抽取血液，加入 2倍以上无菌艾氏保存液 4,℃保存。 时用以无Ca ’ 、g M的H a k n液s洗 3遍，最后一次离

5 min 完毕，后个各小试管 5以 0 0/r im n离心5 m i n,使绵红羊细胞与猪巴淋细胞一起淀沉，最后把组各试小管置于冰箱 4 2放过置夜。第 21 天，从箱冰中取试出管，轻轻同按一方向旋转，使沉细淀胞重悬，加瑞氏染入色液一滴 ,轻轻匀，混静置 5 1 mi n,制成湿计片，数高在倍镜下观察 浅，蓝色较大细的胞淋是巴胞，细红细胞 呈色无。 如图 1凡，附吸有3或个个以3 S R上B C的淋 细巴胞定为 E 花形环成细胞( E FRC吸)附 2或 2个个以心2 0 0 0 r m/ ni . 1 0mi n。取压积 细红配胞成 01 L m L/的 R B C悬S液 L4 J新。鲜猪 血，由 大连市肉厂联提供，无菌从 猪颈脉静抽取液，血以5:比 1例 1与0%柠酸钠檬溶液 (抗凝剂 )混合， 4℃存。保淋巴细胞分离液，度密 1 . 0 0 (±07. 0 0 2 )上，海试剂二厂；无 d c、 V g H的an k 液 s;氏阿液；瑞氏染下S RB C的淋巴 细胞为阴 性胞细。每张玻片数计1 5 0个淋巴细胞 计，算成出花率，取均值平，即为实验样品或对照管的均平值。

液色制：把配 0 . 1 g瑞氏染粉 人放钵中研， 入加 1mL甘油，细研细磨，再人中性甲醇加6 0 mL,溶解

后装入棕瓶色中，放 处暗一周后过滤，存保用。备1 2. 方法

1 . . 21外 周血巴细淋胞制备取定量一的淋巴 胞分细离液玻于璃离心

管中轻，振轻荡，排出泡气；无菌用手续取新鲜猪血， 用 C无 a M、 g的 H nak 液s稀 一释倍，然 后以 2:1 例缓比缓加淋巴到细胞分离 上液面， 3 00 0 r/ ai n,r离心 0 3 m i, n清晰层分后收，各集管淋细胞巴层，用 C无a 、 M g 的 a H k n液洗涤 3s图 1 淋巴T细胞 E花一图环

次调，至5× 0。1 mL细胞/浓 度，用 0并 . 4%台盼染蓝色法测定活胞细比率( 9 0%)以上 l 5 l。 预留1 2. .4数据计算 花成率= E.花环/数淋巴总细胞待 测样品活力实=样品测验定管成花率阴~性对照管成花率 实对验数 据进单行素因差方分析和两组间 On两— Wa ye ANOV A t检验，实验数由以据±又表示【。S0. 6 Lm装至分6个小试管 ,中以备 阳性作照对 其，的余细胞液在 45℃温浴 1 h后取，出用a H k n s 液洗涤3次，1 0 0 0 /r i mn恢，复至原度浓。 1 . 22测待药物 敏致脱E受体淋巴细胞待将测药物无用C a 、 gM的 aH nk 液s溶解稀释至 2 00 0、1 0 0 0、 4 00、 2 0 0、1 0/0￣ g m/。 L将

过经脱受E

体的淋巴细 液胞每个试管按0 1 . L m装分至 9 6小个管中试，每3个 0小管试为一大组， 对应一种待测药物 一，大组中，分成小5。组对 不应同的浓度梯；度剩下的 6个 试管小为阴作性对照。把 3种待测药物按浓度梯度加到各组小试管中.于3 7℃水浴保温 1 h见表。1。表1 实验操作加量2结

果2.1 浴温脱受E体对 结花的影率响 4 5℃ 浴水浴温 1 后淋h巴 细胞E受体有部分

脱，落使 花结由率未脱受E体的前阳性对管照 4(8 .5±2 . 6 3 )%降至脱受体后E的阴性照对管 ( 12±2. 2 1)%(表见 )2两间组差极异显著 (<P 0 01.)。

2表对照 组一E花环实验结果

1 . 2. 3 一E环形花成测定注(”:=6 .± S。)温完浴后毕，把配好制的SR C液按 B个小每管武0 1. L加m入其 中，轻轻摇匀， 37℃水浴2 .2不的同中水药提物对E .环花测 的定浓度 种药3对物一花E环浓度的增加， 起都到一

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叶生等云： E花环-测定法 3种中水药物提免疫的活

性！ !

的作，用但是作用效果不同。表结果2表明地龙水提物度 高结提花率最多，达到 9 1%蒲 公次英之，黄居芩；末同一药不物同的浓度，地水提龙物浓度度与 E梯一花平环均增长率相性关比较明，显在度为浓 40 g/L m时，到最大值达；黄芩水提物最不明显 在， 2 00 g/ mL与 40 t￣g /m有 L处两高峰值；蒲公英水提，物具有一定的相性关，随着药物度浓度梯的递减， E一环花度浓缓慢增加。

表 3 待测样品E 一花实验环果结，(z=6又±,S )[ 2]高学军，李庆章黄芪多.糖和香菇糖多对雏红细胞鸡3讨论

免疫功 的能影响[ J] .东北农业大学学 ,报2 0 0 0 3 . 1 1 (): 9—6 71 .

有文 献道外报周血所有 熟成的 T淋细巴，胞 80~9 5%%胸的腺胞及 5细0%的KN ( na t u r al [3]学尹含免.疫学和免疫学检验实验指导[ M]

.北京：人民卫生版出社，1 99 .8k ill e r ce l1)具上 C有， D( cl u t e r so f I dff e er n it at i no )

[4刘玉]斌， 仕苟 .金动物免 学疫实技验术 M[].长 春吉：科林学技出术版社，1 89 9 .抗原-,C,D仅不参与 T胞细或胸腺细胞与他细胞其的粘，附间接的有利于 T细胞发挥功能，而[5肖旭平],迟卫国 .E花环法测定转移子活因性 J[]国公中卫共生，2 0 0 2 1, 8( 9 ): 1 14—18 1 4 .9

且于由cD分 7子以传可导外来信号而 直接参与胸腺细 胞分的化成熟 ,T细的胞活激增及过值程。此因具有 C,抗原的D淋巴 胞细都有免疫活 k性 l 0 J。凡-能提高 E一花形成环的物质都视为 具有提细高胞免疫功能的作用。所以本文选 了 T用

[6]上海市学医生化 .所临床疫免学检 :验上[册M] .上:上海海科技出社版， 19 8 63.2. [ 7]陈妍柯 ,王亚鹏. E花环法测定胸腺 肽活的性剂量效 [ J应].中 国生药化物杂志， 0 201, 22 ( 5) 2:45—24 6.[]高8利，臣刘字，

梁，等 .羊鑫胎盘免疫调节因子生

淋细巴胞 E一花环形成实验作为初检步中测药水提物免疫活性的标。指

物活性的研究 J[] .国中生 化物杂药，志2 0 04 . 2 5 2 (: )7— 72 .4本实检测验地龙了提水物、黄芩水物提的、蒲英公提物水的免疫活 。性3种提水都物有促 E进 花一环的 形成，说明它们都含有提高免疫活性的 成分，值得进一 开步。地龙发提水的物活性最高，开

[9]L E E K R,B ON G E R S J, GU LTI A D,e l a 1S. t t i sat c ia lva l id at io n o r fep r o u d i bci l tiy o f PHLC epp ti de m p p ian g f o r h e t id en t ti y o f a i n vne t i g sat i on a l d ru g c mpoo u nd b as e d

onp ri c ni pa l c mp on oe nt a n a lys i s[ J]. D r g u D e vI n dP h ar m, 2 00 0,2 (61 0 ): 1 4 5—0 1 0 5 7 .

价发值最 大。地龙 水提物与蒲公水英提物都有一个最佳浓度，超过个这浓度作，用效果反而 渐逐减弱。芩黄提水物的作用果效最低， 同其时浓度梯与度 E花一环的度浓的增长最不具有相关性，这

种[ 10陆芹]章 ,纳相，罗温荣廷，等 .玉米花粉多糖对猪瘟免疫效果的究研[ J].广农西业物生科学， 0 2 1 0 2,0( 1 ): 12— 26 .

[ 11 T]ORAS H I,S TKAAH SA IH N, LA WA M Me。t a 1.A n t i ox d tai v e c o ll ag en—— d r i e ev d p e pt i des i n h u man ..p l c a..

情况待于有一进研步究。

e t ae xt r a t c[J J P l . ac e n ca, 20 2, 203 4 9:—57 2 0

.考参文：献 f1:小唐，云梁再赋 .龙地肽对 小鼠疫功能免的影响[]J中国科医学大学报， 2 003 3 2 (, ):1 15—2 8. 【 21 J LIN YZ,Z HA O A P . CE H N G F.S t u ci e s o feH pat i — t i s - v Bir su Sp e c i f i c T a r sn fe r f a c o rt P e r a p r a ti no[ J .药]物物技生术，2 000 (, )3: 14 1 1—4 5.

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