重组CHO乙肝疫苗细胞培养收换液工艺改进

利用CHO细胞生产重组乙肝疫苗,在细胞培养收换液工艺中建立管道化生产线。采用大罐配成新鲜工作液,过滤除菌,经管道直接输入细胞培养瓶内;细胞培养上清的收集也经管道或直接倒入不锈钢罐内。工艺改进后,细胞原液收获率提高15%,配液污染率降低12%,同时降低了成本。

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第 l第 4期：7 2卷 320 0 2年 8月

生

物

技

术

V0 . 2. 1 1 No. 3 4: 7Au 2O 2 g. O

BI r a ECH N0I GY J

3 1讨论：面喷施 D A,是对棉花施加外源 D A。现蕾期 .叶 N就 N

分和地下部分)是棉花生长发育的转折时期，植株开始加快生长(包括地上部,

高核酸的代谢水平D A可为复制新基因提供足够的原材料，殖生长，此时喷施 N,提,

对养分的吸收能力增强，养生长远远旺于生营

有利于各种酶的合成以及赤霉素 ( A、 G )生长素 (从 ) I的生成和细胞分裂素 ( l含量的增加【,从而加速 C( ) 4 j细胞的分裂代谢，快植株根、、的生长和促进花芽的分加茎叶化，为中后期旺盛的生殖生长打下物质基础。 棉花进入盛花期，面积指数已达到最大值，养生长减叶营弱，而生殖生长居于优势，植株生长、花受精及花铃发育均需开消耗大量有机养料，养生长和生殖生长矛盾加剧，而导致营从指标原工艺新工艺蕾铃大量脱落 L。此时喷施 D A,提高座铃率，加总铃数 3 j N能增培养液污染率 1% 5 3%和单铃重，作用机理： 1可能是由于提高了花、房、等幼其 ()子胚产量 1~噶/ 8∞亚批 0 20 2亚批 2~ 6嫩生殖器官内细胞分裂素的含量水平，而细胞分裂素能阻止核纯度 9 .2 7 0% 9 .3 8 0%酸酶和蛋白酶等一些水解酶的产生，而保证了核酸、白质因蛋血清含量 1 .n/ l 5 6 g m 7.n/n 8gf l和叶绿素的不被破坏，延迟营养器官的衰老【,保生殖生长 4确]内毒素测定 8 U m E/ l 3 U m E/ l所需养料的合成和供应。 ( ) 2由于赤霉素、生长素和细胞分裂素多分布于幼嫩的生殖器官中，而它们的生理作用之一就是能使营养物质向着它们所在部位源源运输，使其所在部位成工序新工艺旧工艺为营养物质“”4,这样就保证了生殖器官对养料的需要，库 L j促进其生长发育与成熟，生保蕾保铃增加铃重的效果。( )产 3生长素的另一个生理作用是能防止花柄、

柄离层的形成，果喷施大罐集中配制完全培取出贮存的 D ,Ⅷ二 D A后， N由于蕾铃内生长素浓度提高，而可以减少离层的形因成，制蕾铃的脱落【,到提高座铃率的效果。抑 4达 J 3 2结论： .从对试验结果的分析与讨论，得出如下结论： 1可 ()对棉花施用外源 D A能产生促进棉花生长发育，高座铃率 N提和单位面积总铃数，加单铃重，提高皮棉产量的增产效果。 2结果 增 2 1建立细胞培养收换液的集合系统，系统为管道化液体 .该 ( )同生长期，用不同浓度的 D A,产效果也不一样。 2不施 N增 输入和罐收液系统，无茵试验验证合格。经 参考文献：

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配鐾滤 暮液罐过茎孽细培藻：鸯鎏胞养蓄

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[] 1欧伶，建瑛，俞金新根 .用生物化学[ .京：应 M]北化学工业出版社，2 0 2 8. 0 1. 9

培养基一配液罐一预过滤一除茵过滤

生产

[] 2姚金保，张桂馥 .油菜喷施核酸类肥料效果的初步研究[]江苏农操作室一多个细胞培养瓶一多个收液罐 J.圈 1细胞培养收换液系统业科学，94。:2—3 . 19 l 3 3 . 细胞生长良好、达正表[] 3王荣栋，尹经章 .物栽培学[ .作 M]乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社， 22使用新输入系统提供的培养液，19 4 9 7. 43. 7 4 8—4 9. 7

[] 4潘瑞炽 .物生理学[ .植 M]北京：高等教育出版社，0 112—16. 2 0 .7 8

常、量稳定。产 2 3节省生产各环节的人力、力、间、源约加一4%。 .物时能 0

3 1细胞培养情况： . 使用新工艺配制的培养液细胞生长良好， 表达稳定，滴度正常。培养基的配制工艺影响培养基的质量， 培养基的质量直接影响细胞的生长繁殖及表达…。采用管道输入的配液工艺，日配制，日使用，供的培养液是新鲜当当提金立杰，俊业，延明，杰，忠杰，秀香孙刘隋李朱的，于细胞生长。分装贮存的培养液随放置时问的延长而引利 (春生物制品研究所

,林长春 10 6 )长吉 30 2 摘要：利用 C O细胞生产重组乙肝疫苗，细胞培养收换起营养成分的降解。 H在 .降低污染：工艺在过滤前一次加入 3~5种辅新液工艺中建立管道化生产线。采用大罐配成新鲜工作液，滤 3 2优化工艺，过减除菌，经管道直接输入细胞培养瓶内；胞培养上清的收集也料，去原有工艺滤后培养液每大瓶开启 3~5次添加辅料的细每 0升培养液至少可减少 3次因开启而带来的污染机经管道或直接倒入不锈钢罐内。工艺改进后，细胞原液收获率操作， l会。无需分装、贮存、二次开启，作时间减少，染机会减少。操污 提高 1%, 5配液污染率降低 1%, 2同时降低了成本。 原配液造成的污染约 1 O~1%。新方法因管道封闭性好，作 5操关键词：组乙肝疫苗；重细胞培养；生产工艺可使配液污染率降至为 0~3%。同时减少劳动强度， 中图分类号：Q6 T 44文献标识码： A文章编号：04—3 1 10 1X步骤少，提高劳动效率。 ( )4—0 3 0 07—0 1作者利用 c l (国仓鼠卵巢 )胞生产重组乙肝疫苗已 3 3生产成本： lo中细 .由于减少工序，工、时，减少辅助用品及省省也有近 1 O年的历史。细胞培养由 3 L小转瓶、O IL中转瓶到 1L污染所至的浪费，合来看在生产、液、 5综配高压灭菌和洗刷工序物 0 0 大转瓶，液和收液系统由小管道到大管道、换由独立分散管道上节省人力、力和能源约 l%~3%。 .①②到集合中央管道，经改进逐渐适合于大规模生产，者利用 34新工艺对人员和操作的要求：操作严格无菌熟练；严几作各③可能的生产条件，成大规模细胞培养管道化生产线的建立，格执行二人复核制，道工序设有验证和双重保障措施；配完 根调酸经生产验证，进的工艺不仅可提高产量、量，可降低成液组和细胞组要协作良好，据细胞生长所需，配辅料、碱改质还本。并与 G P要求接轨，实用性和先进性。 M有 度和液量[ 。参考文献： l材料和方法11材料 .[] 1熊宗贵 .

发酵工艺原理[ .京：国医药科技出版社 .9 5 6 M]北中 19 .5—

重组 C HO乙肝疫苗细胞培养收换液工艺改进

3结果和讨论

11 1生产所用的原始细胞株为 C O细胞 ( 8株，中国预[] .. H 2 2由 2李继珩 .物工程[ .京：国医药科技出版社 .9 5 10—1 1生 M]北中 19 .3 3. 防医学科学院病毒研究所提供。 112 0 . . 3 0—50 0 L不锈钢配液罐和 5 0~IO O L不锈钢收液罐为长春市星火有色金属焊接设备制造有限公司产品。输液管道为上海橡胶总厂产品，径分别为 2 5 m、 .c,点为耐高直 .c 1O m特张汉渡段昌群，温、高压、耐耐磨损。预滤柱 3 0英寸，芯 0 2—0.岬，菌滤 . 4除 (. 1云南大学生物学系，云南昆明 60 9; 5 0 1滤柱 3英寸， .w,为美国 P I司产品。1L瓶机为 0 02 n均 A L公 5转 2云南大学环境科学系， .云南昆明 60 9 ) 50 1长春生物制品研究所工务处自制。 关键词：土壤；生物多样性； N微 D A提取 11 3 D lb培养基为美国 GB O B L公司产品，号 8 . . bE l IC R批 3—中图分类号： 93 O 3文献标识码： A文章编号：0 4—3 l 10 lx

66 .

直接从土壤中提取 D A的方法 N

54 S 8 0 8 A、 3—5 4 E 0 8 K。

12 .

研究微生物的多样性。即微生物的种类和数量的多少是评 12 1培养液的配制和输入系统：锈钢配液罐注入蒸馏水，价土壤质量的重要指标。由于土壤微生物种类繁多，量巨 ..不 数高压灭菌后，却至 3冷 o~3℃, ME粉末搅拌均匀澄清后， 5 D M添加血清、酸氢钠及抗生素等一次配成工作液。接管道依次通碳收稿日期"( 2—0一l:回日期"( 2 4 1 -} 20 1 8修 -}—0—0 20

方法

(0 2 0 20 )4—0 3 O7—0 3

基金项目：南省工业微生物发酵工程重点实验室开放基金资助云收稿日期：0 2—0—0:回日期：0一0 20 1 8修 2 4—2 6

作者简介：金立杰 (97一)女，士， 15,硕副研究员，事基因工程产品的

从研制和生产。

( F 0 1—0 ) K 20 1作者简介：张汉波 (90一)男， 17,副教授，在读博士生，事微生物生态从学和遗传学的研究。段昌群 (9 6一)男，士，授，士生导师， 16,博教博从事污染生态学研究。

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