中国农科院基因工程概论历年考博试题集锦

中国农科院博士入学基因工程概论试题汇编

2005年

2、噬菌粒的定义和优点 定义：一类由质粒载体和单链噬菌体载体结合而成的新型的载体系列，称为噬菌粒（phagemid或phasmid）。

噬菌粒是一类人工构建的含有单链噬菌体包装序列、复制子以及质粒复制子、克隆位点、标记基因的特殊类型的载体。它是包含了丝状噬菌体大间隔区域的质粒，是一种双链质粒，含噬菌体来源的复制子，在细菌的细胞中出现有辅助噬菌体的情况下，可被诱导成单链DNA噬菌粒同时具有噬菌体和质粒的特征，可以像噬菌体或质粒一样复制。它兼具丝状噬菌体与质粒载体的优点。

优点：1.双链DNA既稳定又高产，具有常规质粒的特征；2.免除了将外缘DNA片段从质粒亚克隆于噬菌体载体这一繁琐又费时的步骤；3.由于载体足够小，故可得到长达10kb的外源DNA区段的单链。

3、差异显示原理

1992年，梁朋和Pardee首次提出差异显示技术(DD-PCR)，并且利用这一技术克隆了几个基因。由于该技术具有快速、灵敏、简单和可分析低丰度mRNA的优点，很快成为克隆新基因和研究植物基因表达的有力工具。这项技术最初用于医学研究上，近年来已开始在高等植物研究中应用，为研究高等植物的发育、生理代谢、基因表达提供了重要的技术手段。 原理：是利用一系列的oligo(dT)引物，逆转录真核生物细胞中全部表达的mRNA，通过PCR扩增的方法，转换成cDNA双链，再利用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，将有差异的片段分开，筛选出目的基因。 操作步骤：

(1)从植物组织中提取总RNA：在这个步骤中注意不能有DNA污染，一般用无RNA酶的DNA酶在37℃下处理30 min

(2)在逆转录酶作用下：以Oligo T11MN 为引物(M为G、A、C中的任一种，N为A、C、G、T任一种)，进行逆转录

(3)PCR反应：扩增cDNA的第一条链

(4)扩增后cDNA进行聚丙烯酰胺凝胶电泳：使差异表达的cDNA片段在6%测序胶上分开 (5)找出不同处理间差异显示的条带：从胶上切割下来，并回收，再进行第二次扩增 (6)克隆差异片段：差异片段可作为探针

(7)Northern 杂交：验证目的片段，去掉假阳性片段 (8)对目的片段进行测序

(9)以克隆的目的片段为探针：从基因组文库中筛选出相应的全长基因。

4、酵母双杂交原理和进展

酵母双杂交系统利用杂交基因通过激活报道基因的表达探测蛋白－蛋白的相互作用。单独的DB虽然能和启动子结合，但是不能激活转录。而不同转录激活因子的DB和AD形成的杂合蛋白仍然具有正常的激活转录的功能。

酵母双杂交由Fields在1989年提出. 他的产生是基于对真核细胞转录因子特别是酵母转录因子GAL4性质的研究. GAL4包括两个彼此分离的但功能必需的结构域. 位于N端1-174

位氨基酸残基区段的DNA结合域(DNA binding domain，DNA-BD)和位于C端768-881 位氨基酸残基区段的转录激活域(Activation domain,AD).DNA-BD能够识别位于GAL4效应基因(GAL4-responsivegene)的上游激活序列(Upstream activating sequence,UAS),并与之结合. 而AD则是通过与转录机构(transcriptionmachinery)中的其他成分之间的结合作用，以启动UAS下游的基因进行转录. DNA-BD和AD单独分别作用并不能激活转录反应，但是当二者在空间上充分接近时，则呈现完整的GAL4转录因子活性并可激活UAS下游启动子,使启动子下游基因得到转录。

2004年

一、名词解释

1 、2μ环2、hat选择 3、Ri质粒4、cDNA 4、染色体步查 6、基因文库 7、α互补 8、YAC 9、BAC1 10、共整合载体 二、简答题

1、举出植物转基因的三种方法，并说明其原理。 2、Southern印迹的原理及应用口 3、AFLP的原理及其应用。

4、拟南芥和水稻己进行全基因组测序，简述其对科学和社会领域的重要意义 5、简述质粒、噬菌体和柯斯粒三种载体的结构特点。

三、如果我们己经得到水稻的一个cDNA克隆，请设计一个验证该cDNA功能的试验步骤。

基因工程原理2003年试题

考了5个名词解释（20分），5个判断题（10分），简答题（30分），问答题（40分）。名词解释、判断题我大都记不清了。

简答：1. RNAi（RNA干涉）的工作机理和作用。 2. 双脱氧测序法的原理。

3. 基因芯片的种类和工作原理。 4. PCR的工作原理。

问答：1. 研究DNA与蛋白质相互作用的方法有几种。 2. 如何提高外源基因片段在原核细胞中的表达量。 3 叙述功能基因组学的内容与意义。 名词： 脉冲电场电泳法

RNA保护（RNA protection） （80%的题都出自这里）

1． 什么是基因工程？试述在农业生产上的意义。

2． 聚丙烯酰胺凝胶电泳与琼脂糖电泳在应用中有何不同和特点。 3． 双脱氧法测序的基本原理是什么？

4． SOUTHERN印迹的基本原理及其应用。 5． 试述两种转基因方法并说明其原理. 6． 双元载体的概念及其构件原理 7． AFLP的原理及其应用.

8． PLASMID和COSMID作为载体的特点. 9． 试述RFLP

10． 试述转座子标签法克隆目基因 11． 试述定位克隆技术 12． 试述RNA编辑. 13． 试述YAC

14． 试述染色体步移 15． 试述基因芯片

我想基因工程原理无非就是这些基本原理，2004年的论述题是获得一个克隆怎么研究功能，

2002年中国农科院博士入学基因工程概论试题

一、简答题

1、聚丙烯酰胺、琼脂糖在DNA电泳中的区别是什么？ 2、举出动物转基因的两种方法，并说明其原理。 3、双脱氧法测序的原理。

4、以拟南芥或玉米为例，说明转座子标签法进行基因转移的原理。 5、Southern印迹的原理及应用。

三、试论述植物基因工程研究进展以及在农业生产上的意义。

2001年中国农科院博士入学基因工程概论试题

一、名词解释

1、限制性内切酶 2、同裂酶 3、核酶 4、2μ环 5、hat选择 6、Ti质粒 7、T-DNA 8、同功tRNA 9、反义tRNA 10、有义链11、α互补 12、基因文库 13、cDNA 14、染色体步查（是否缺一个？） 二、简答题

1、举两种植物基因转移的方法?简述其原理。

2、Southern印迹的基本原理，这种方法有何应用。 3、噬菌体与cos作载体有何区别？ 4、AFLP的原理及其应用

5、普通PCR与RAPD有何区别，何谓普通PCR？ 6、何谓双元载体，简述其组装过程及其作用机理？ 三、判断题

1、无论用哪种转化方法均可用PBR322作载体

2、进入细菌的外来DNA之所以被降解，是因为细菌只修饰自身DNA，不修饰外来DNA 3、只有粘粒端才可以被连接起来

4、用自身作引物合成的cDNA链，往往cDNA并不完整

1999年中国农科院博士入学基因工程概论试题

一．名词解释：

1．CDNA 2 Ti质粒 3. 2u环 4. HAT选择 5 a互补 6 YAC 7 转导 8 基因文库 9 限制性内切酶 10 染色体步查 二．问答题：

1 举例说明两种植物转基因的方法。

2 Phagmid和cosmid作为载体的特点。 3 AFLF原理及其应用。

4 双元载体的概念及构建原理。 5 Southern吸印杂交的原理及应用。

1995年中国农科院博士入学基因工程概论试题同98年 1994年中国农科院博士入学基因工程概论试题 1 AP-PCR和普通PCR的区别。

2 用于植物动物的基因转移方法有何区别。 3 植物基因组和动物基因组结构有何区别。

4 目前已克隆转录因子有那些，采用什么方法克隆。 5 RNA的自我剪切有几种方法其过程。 6 获得某一基因，如何得知其功能。 7 评价转基因安全性。

1998年中国农科院博士入学基因工程概论试题

一、什么是基因工程，基因工程在农业生产上有何意义？ 二、简答：

1、聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖凝胶电泳应用有何特点？ 2、举两种植物基因转移的方法?简述其原理。 3、双脱氧法测序的原理

4、转座子标签法克隆植物基因的原理

5、Southern印迹的基本原理，这种方法有何应用？

6、在DNA复制过程中会形成一种复制体（replisome）的结构，它是由哪几部分组成的？ 7、Sanger测序法的基本原理是什么？

1999年中国农科院博士入学基因工程概论试题

一．名词解释：

1．CDNA 2 Ti质粒 3. 2u环 4. HAT选择 5 a互补 6 YAC 7 转导 8 基因文库 9 限制性内切酶 10 染色体步查 二．问答题：

1 举例说明两种植物转基因的方法。 2 Phagmid和cosmid作为载体的特点。 3 AFLF原理及其应用。

4 双元载体的概念及构建原理。 5 Southern吸印杂交的原理及应用。

1995年中国农科院博士入学基因工程概论试题同98年 1994年中国农科院博士入学基因工程概论试题 1 AP-PCR和普通PCR的区别。

2 用于植物动物的基因转移方法有何区别。 3 植物基因组和动物基因组结构有何区别。

4 目前已克隆转录因子有那些，采用什么方法克隆。 5 RNA的自我剪切有几种方法其过程。 6 获得某一基因，如何得知其功能。 7 评价转基因安全性。

1998年中国农科院博士入学基因工程概论试题

一、什么是基因工程，基因工程在农业生产上有何意义? 二、简答:

1}聚丙烯酸胺凝胶电泳和琼脂糖凝胶电泳应用有何特点? 2、举两种植物基因转移的方法?简述其原理。 3、双脱氧法测序的原理

4、转座子标签法克隆植物基因的原理

5、Southern印迹的基木原理，这种方法有何应用?

6、在DNA复制过程中会形成一种复制体（replisome）的结构，它是由哪几部分组成的? 7、Sanger测序法的基木原理是什么?

1994年中国农科院博士入学基因工程概论试题 1 AP-PCR和普通PCR的区别。

2用于植物动物的基因转移方法有何区别。 3植物基因组和动物基因组结构有何区别。

4目前己克隆转录因子有那些，采用什么方法克隆。 5 RNA的自我剪切有几种方法其过程。 6获得某一基因，如何得知其功能。 7评价转基因安全性。

中国农业大学2006年基因工程溉论试题

一、 名词解释（20个，每个2分）（全部是英文，有的名词我忘记了英文，

故写的是中文） 1. GMO 2. 粘性末端 3. Ti plasmid 4. shuttle vector 5. 胚胎干细胞

6. 同尾酶（该英文不认识，不知道是同尾酶还是同裂酶，你把这两个英文都看看）

7. DNA library 8. adaptor 9. polylinker 10. DNA ligase 11. α-completation 12. BAC

13. nick translation

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