生物样品中痕量甲基汞的气相色谱法测定

生物样品中痕量甲基汞的气相色谱法测定

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中国卫生检验杂志 19年茅 8巷第 2期 8 9

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研究报告

生物样品中痕量甲基汞的气相色谱法测定

暗医学篡 尔1] ,尔科公生 滨D/滨大共学暗 0、卫院。 5) 0,暗尔滨公

目前，基汞的测定方法主要采用气相色甲谱——电子捕获法和冷原子吸收光谱法测定，

富集：一条饱台半胱氨酸滤纸，成螺旋取拧型，人萃取液中，荡 l mi,出甲苯，加放振 O n倾再入 2甲苯冲洗滤纸条，复两次，后取出自 ml重然 然干燥。尽甲苯。燥后的滤纸条放入 l l挥干 m具塞试管中各用。 洗脱：装有富集后滤纸条的试管中加人向01 . ml KBr 0 mlH2 (d和 0 8苯，没纸， 1 S ) . ml提

前者优于后者，须考虑无机汞存在，品经莘不样取、富集后直接进行气相色谱分析在测定甲但基汞很低的生物样品时灵敏度不够，差较大。误 因此，生物样品的前处理需进一步改进。对 测定甲基汞的样品前处理目前仍基于 Gae的 Weto改良法，采用巯基乙酸、胱 g s o多半氮酸溶液或硫代硫酸酯纯化。用苯或甲苯进行萃取。这种方法操作比较麻烦 .取率低，极萃又易发生乳化，响测定结果影

条，轻振荡，脱平衡 3 mi,色谱分析用。轻洗 0 n备 1 2 2发样处理：发样 2 d,碎，丙酮 .取一 g剪用一

水混台液洗涤三次，后置于 2 rl塞试管然 O具 a中加入 7 5 lI a H溶液 j 1 nI于 9 C . mo/ N O一 O 1. 0

本文在 Weto改进方法基础上， so将生物样品用甲苯萃取，半胱氮酸饱台滤纸富集，苯洗脱后，接进行气相色谱分析服了上述方法之直克不足，高了富集效率，作比较简单，有较提操具高的灵敏度 01n/ . 2 g g和良好的重现性 C一 V3 8 。适用于生物样品中痕量甲基汞的快速 .6

恒温箱中水解 3 mi,解液移人 1 ml塞试 0 n水 0具

管中，上述方法富集、按洗脱操作。1 . 2 3测定

色谱条件： 2 m×1 0r玻璃柱 . r a 5

e a内装涂以 2 OV一一 7和 1 QF- l的 Ch o s r 0 l 5一 r meo b

W. AW . DMCS 6~ 8目载体。柱温 1 0C, 0 0 检 9

分析。 1实验部分 1 1器材及试剂 .器材： - 6 mp GC A r一附 E D检测器； C 3 ml1 mll具塞试管。胱氮酸饱台滤纸。 5、 0、 ml半 试剂 t一半胱氨酸盐酸盐，用时用 2 I 临 O柠檬酸钠溶液配制。 mo/ H S 饱台硫酸 2 lI O的铜溶液。苯、甲苯 (级纯 )优。

测器 2 0载气：纯氮，速为 4 mlmi 3 C,高流 5/ n 测定： 4 l样或发样洗脱液 .人气相取，鱼 u注

色谱，复三次，次测定峰高结果应≤5 .重三 随即注入 4 I准溶液，浓度接近于样品浓度 标其为佳，者比较计算其 Hg的浓度两Hg p m ) (p一×、l 1 rw

’.

h样品测定的平均峰高一

h一标准溶液测定的平均峰高 c标准溶液中 Hg的浓度一w一样品重量 2结果与讨论

1 2操作方法 . 1 2 1鱼样品处理：取 2 . .称一鲜鱼祥 (.~ 02 1 5于样 )用玻璃匀质器匀化，人 2 m1 .g,移 5具塞试管中 .入 2 KB, a mo/ H2O和加 ml r 2 d 2 lI S

2 1饱台半胱氮酸滤纸制备条件的选择 .

3甲苯，轻振荡、衡 2 n n, 6 0 rn n 轻平 0 f于 0 0/ f i i离心 5 n吸出有机相置于 1ml塞试营中。 mi, O具

饱合半胱氨酸滤纸的制备条件直接影响富集甲基汞的效率。此，文对浸泡滤纸的半胱为本

向样品再加入 2甲苯重复一次萃取，次萃 ml两取液合并备用。】 拙虹智瞽市卫生畴蛭站

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氨酸溶液的浓度、泡时间及滤纸条的尺寸进浸行了深 A宴验研究，果表明：滤纸条尺寸~结在定的情况下，胱氨酸浓度在 2以下时，集半 富甲基汞的回收率在 8;以上时均在 9。 1 3 2浸泡时间我们试验了 1 ri、 0 n 0 i 0 n 2 mi、3 r n、 a a

间影响

很大，此，文选用 0 4 g ml标准因本 .￣/的 z溶液进行了实验研究。果表明：结富集有甲基汞的滤纸在解吸前，将滤纸用 4 ll H S 需 mo/ O溶液浸透，则纸相中的甲基汞不能全部转移到否有机相。在解吸时，始殖平衡时间的增加，开色

6 ri,果 3 ri以上为最佳，收率在 9 0 n结 a 0 n a回 0以上。半胱氨酸滤纸条的尺寸对回收率的影响见表 1 。表 1饱台半胱氨酸滤纸条尺寸对回收率的影响

谱峰增高，0 n后趋于衡定，明纸相中的甲 3 mi说基汞已全部移至有机相。因此本实验确 4 lI S .m1透滤纸；吸平衡时 mo/ H2O 0 1浸解 3 mi然后再进行气相色谱分析。 O n 2 4线性范围及检出下限 .取 l/的甲基汞分别配制成 0 Ot0 mg ml .l l g rl准溶液，照实验部分 1 2操作，￣/n标按 . 复三次测定，果绘制标准曲线如图 1结。从图中可见，性较好，较宽的线性线有围，=0 9 8, 1 3+ 1 2 r . 9 7 Y= . 1 4 x

从表 1中可以看出，纸条的尺寸对富集滤

最低检出下限用实际样品加标实验。在 H

甲基汞的回收率是有影响的， 0 2 c除 .×4m。回 收率小于 8,他均在 9以上，出良好 5其 0示的富集效率。因此，制各饱台半胱氨酸滤纸条的最佳条件为：半胱氨酸溶液； .×4 m 3 0 4 c滤纸条泡 3 ri;浸 0 n自然干燥后备用。 a 2 2甲苯萃取液体积对滤纸富集效率的影响。 . 在滤纸条面积一定的情况下，集甲基汞的效富

样品 5, 10 l解吸， 4 O 1人色谱 g用 .m苯取 .注测得捡出下限为 O 1n/。仪器信噪 j . 2g g

率随着甲苯萃取液的体积的增加而降低 (表见 2, )这是因为萃取液体积过大，纸条吸附不完滤全所致。表 2甲苯体积对蔼纸富集效率的影响E m【甲基汞，

圈 1甲基汞标准曲缓

2 5重现性 .

本实验研究采用二次萃取，总体积 5。 ml并在滤纸富集时振荡 1 mi,使甲苯与滤纸条 0 n以

取鱼样品六份，别加 A

高中、三个浓分低度的甲基汞标准溶液，照实验部分 1 2操作。按 .

充分接触，高富集效率。另外，提当萃取液甲苯体积过大时，以增加滤纸条面积提高富集效可

铡得结果经统计学处理，准差为 1 1; D标 . 8 RS= 3 8,出良好的重现性。 .6示2 6实际样品对照实验

率。因此，实验中既要考虑甲苯萃取样品中甲在 基汞的效率，要考虑萃取液体积对饱合半胱又氡酸滤纸富集甲基汞效率的影响。 2 3苯解吸滤纸中甲基汞的条件选择 .富集有甲基汞的饱含半脆氨酸滤纸，用在有机溶剂苯解吸时，纸相酸度及溶剂平衡时受

巯基棉酸提取法富集甲基汞是传统的方法，验证本研究方法的可靠性及数据的准确为定，用 4种鱼样和 4个度样，两种方法进行采用分析，值结果列入表 2中。均

对表中数据进行统计学配对 T检验， t示

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一 2 5 2 t s 3 1 .> 0 0。两法呈高度相 .3,一 .8 p . 5 关，显著性差异。明采用饱合半胱氨酸滤纸无说条法富集生物样品中甲基汞进行色谱分析方法可靠，据准确数表 2殪基棉酸法和滹纸条测定结果鱼样 F/ gg琉基棉酸滤纸条法0 5 .0 6 0 .O4 8

集生物样品中甲基汞，但操作简单 .且排除不而了其他有机物干扰，谱埠型好，峰少，免色杂避了样品处理时的乳化现象，集效率高，现性富重好，敏度高。用于生物样品中痘量甲基汞的灵适测定。参考文献1 M. Hor a n R B r . M n i e e h o h v ta d A. x ne d f d M t n f r t e De i d—

发样0 031 . 0 27 .0

t r n to fM e hym ec r yGa r e mi a in o t l r u y b sCh oma o r p y _ tg a h r l m a 1 9 ( 7) 20~ 2 2 a g 0; 3 2{ 7 1

2 M HO v t K M a ta p l g n me a[ he 1 8; 2 Ya y e tA p Or a o t l c m

9 8 1:

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谱分析姚文清刘彩莲赵汉良姜伟

五探索霍乱流行病学规律，了解霍乱孤菌本身的构成及变异在流行规律中的作用，为很已

(㈣5 ) 1沈用 1

6

通脂皿离挑典亩. 5通琼脂平皿分二养取型垂 琼平分培，藩 m种 l午I肉扬管，7 B 3 C过夜培养。 1 3 2细菌裂解： 1 5菌液于 8 0 rmi ..取 . ml 00/ n

多学者所重视。分子流行病学是近十年来发展起来的一种新的流行病学研究方法，是将分它

离心 1 mi收集菌体，上清。加^ 0 6 E 0 n,弃 . ml T液 (1 mmo/ Tr— HC1 H7 6 8 0 0 lI i s p .— .

子生物学技术应用于流行病学研究中，分子从水平的基因变异来探讨人群中传染病的发生发展和传播关系。为更准确提供防治对策 .效地有控制疾病流行提供有益的见解。本文采用染色体 D NA限制性内切酶谱分析技术，我省对 18一 19 9 O 9 6年分离的部分霍乱弧菌进行了分析研究。

O 1 l[E TA)菌。 A 0 S 0 1即 . mo/ D 悬加 1 DS8#, 刻放于 6 C水浴 1mi。 8 0 n 1 3 3 DNA提取及纯化用等体积饱和酚 . .先提取 1次，后用等体积酚/仿提取 3 5次，然氯—

直至中间蛋白层消失为止。最后用等体积氯仿抽提 1次 . 1 1用 7 o体积的 3 lI A, 5 mo/ Na c 9 冷乙醇沉淀 .空抽干或自然晾干， DNA于真溶5— 10 1 0 0#液中。 TE

1材料和方法 L1菌株：次实验所用菌株是辽宁省自 本 1 8一19 9 O 9 6年分离的部分埃尔托霍乱弧菌，其来源及噬菌体生物分型见附表 .中菌株编号其的前二位数字是分离的年代 .三位数字则为后

1 3 4酶切图谱的制备：纯化的染色体 ..取 DNA 1一 1作适当稀释，据 DN的量和 O l 5根 A酶的活性强度加适量的核酸限制性内切酶 HidⅢ、 s I及相应的缓冲液，匀，7C水洛 n Pt 混 3 2 3。将消化好的样品加染料缓冲液 5 1— h#混匀， 1的琼脂糖凝胶中 (中溴

化乙锭含量在 其为 0 5-/ )泳走样，压 4一 6 V,压 . p m1电 g电 O O稳

分离序号，菌株鉴定按霍乱防治手册进行1 2培养基：离菌株用普通营养琼脂，菌分细培养用 I B培养液或普通营养肉汤。 13染色体 D . NA的提取与纯化以及限制性内切酶谱的制备按文献口进行 .述如下： 概

1— 1 h电泳缓冲液采用 T一硼酸盐 ( E 0 2。 m TB )系统。电泳完毕 .凝胶于紫外灯下观察结果并置

1 3 1细菌分离培养：保存的菌种接种于普 ..将

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中国顼防医学科学院音行病学散生钎学研究所 i c

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