10005微生物限度检查操作规程

文件编号 文件名称 制 定 人 审 核 人 批 准 人 生效日期 管理部门 质量部 序号 01

分发部门 微生物限度检查操作规程 版本号 制定日期 审核日期 批准日期 00 QB-WI/10-005-00 页码 2017.03.08 修订原因及目的 文件新建 总经理□ 技术部□ 质量部□ 生产部□ 管理者代表□ 商务部□ 销售部□ 行政部□ 仓库□ 修订内容 /

文件编号 文件名称 1. 目的

规范微生物限度检查方法及操作，使纯化水、内包材、环境监测、清洁验证及其他要素的微限 检查符合ChP2015规定。 2. 适用范围

适用于纯化水、内包材、环境监测及其他要素的微限检查。 3. 引用/参考文件 ChP2015

实用药品微生物检验检测技术指南 《取样及留样管理规程》 4. 职责

质量控制实验室负责执行对相关要素的微限检查，QA负责执行监督并参与OOS调查。 5. 程序 5.1 仪器用具

高压蒸汽灭菌锅、洁净工作台、生化培养箱、霉菌培养箱、三角瓶、培养皿、胶塞、移液枪、微型台秤或电子天平、微限检查虑架、酒精灯、镊子、0.22μm 滤膜等。 5.2培养基、稀释液及试剂（均已经121℃，15min灭菌处理）

胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）、沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA）、pH7.0 NaCl-蛋白胨缓冲液、无菌生理盐水、R2A琼脂培养基、胰酪大豆胨液体培养基（TSB）、麦康凯琼脂培养基、麦康凯液体培养基等。 5.3 检查

5.3.1 纯化水微生物限度检查 5.3.1.1 样品准备

微生物QC手用75%酒精消毒后，将采样口周围进行消毒，打开采样口阀门使水自流至少5秒后用灭菌三角瓶或者无菌取样袋快速取样至少10ml。打开阀门后在需要时仍可以使用消毒剂进行再次消毒后取样。取样结束后，迅速用胶塞将三角瓶封口，装于取样箱内转移至微生物实验室进行检验，

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样品转移过程中特别注意污染防护。样品如不能立即检测，可以在2-8℃条件下最长保存8h。 5.3.1.2 实验室准备

实验前将相关试剂、仪器、设备、耗材等转移进超净工作台或者传递窗内，开启实验室与超净台送风，调节超净台风速达到0.36-0.54m/s后开启超净台、微限室、更衣间、缓冲间、传递窗紫外灯，保持30min。 5.3.1.3 微限检查操作

微生物QC按照《人员进出洁净区管理规程》进行更衣、消毒后进入实验室关闭紫外灯后准备开始试验。点燃酒精灯，使用酒精棉将虑架过火冷却后安装滤芯、滤膜和虑杯。三联虑架启用两只，分别向两只虑杯内移入1ml纯化水后各加入100ml pH7.0 NaCl-蛋白胨缓冲液或无菌生理盐水启动真空泵进行抽滤。抽滤结束后，不锈钢镊子在酒精灯火焰上过火冷却后将滤膜夹下，正面朝上平铺于R2A琼脂培养基上。R2A琼脂培养基于30-35℃生化培养箱中倒置培养120h后计数。虑杯为一次性虑杯，滤芯在进行后续样品检测之前应过火灼烧灭菌后才允许使用，检测结束后应将阴性对照一同培养。纯化水微限上限为100cfu/ml。 5.3.2内包材微限检查 5.3.2.1 样品制备

铝箔纸到货后，选取一卷铝箔纸转移进生产车间清洁后除去外包装后按照《物料进出洁净区管理规程》转移进洁净区内。微生物QC按照《人员进出洁净区管理规程》进入洁净区后用灭菌剪刀剪开铝箔纸密封袋，用内开孔面积为100cm的取样模具，每个棉签擦拭5次，用2个棉签共擦拭10次，每卷铝箔选取三个位置。三个位置的取样总面积为 300cm。每支棉球擦拭后立即投入盛30mL无菌生理水的三角瓶中并封好瓶盖。样品在检验前剧烈振摇，禁止超声处理。取样段应剪断废弃。 5.3.2.2 实验室准备

实验前将相关试剂、仪器、设备、耗材等转移进超净工作台或者传递窗内，开启实验室与超净台送风，调节超净台风速达到0.36-0.54m/s后开启超净台、微限室、更衣间、缓冲间、阳性室、传递窗紫外灯，保持30min。 5.3.2.3 内包材微限检查

微生物QC按照《人员进出洁净区管理规程》进行更衣、消毒后进入微限室关闭紫外灯后准备开始试验。点燃酒精灯，使用酒精棉将虑架过火冷却后安装滤芯、滤膜和虑杯。三联虑架启用两只，分别向两只虑杯内移入10ml供试液后各加入100ml pH7.0 NaCl-蛋白胨缓冲液或无菌生理盐水启动真空泵进行抽滤。抽滤结束后，不锈钢镊子在酒精灯火焰上过火冷却后将滤膜夹下，一只正面朝上平铺于胰酪大豆胨琼脂培养基上，另一只正面朝上平铺于沙氏葡萄糖琼脂培养基上。胰酪大豆胨琼

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脂培养基于30-35℃生化培养箱中倒置培养72h后计数。沙氏葡萄糖琼脂培养基于20-25℃霉菌培养箱中倒置培养120h后计数。虑杯为一次性虑杯，滤芯在进行后续样品检测之前应过火灼烧灭菌后才允许使用，检测结束后应将阴性对照一同培养。内包材微限上限为需氧菌1000cfu/100cm，霉菌和酵母菌100cfu/100cm。 5.3.2.4 控制菌检查

内包材控制菌为大肠埃希菌。微生物QC按照《人员进出洁净区管理规程》进入阳性室。将5.3.2.3中检测剩余10ml样品无菌密封后转移至阳性室，瓶身经75%酒精消毒后转移至生物安全柜待检。将供试液加入100mlTSB中经30-35℃条件下培养18-24h，后移取1ml培养物加入10ml麦康凯液体培养基中经42-44℃条件下培养24-48h，将培养物划线于麦康凯琼脂培养基上经30-35℃条件下培养18-72h后观察。麦康凯琼脂培养基上无菌生长或者虽然有菌生长但经鉴定非大肠埃希菌，则判定大肠埃希菌未检出。同法制备大肠埃希菌阴性和阳性对照。控制菌应不得检出。 5.3.3 环境监测或者清洁验证微限检查

采用擦拭法测试微生物的环境监测或者清洁验证微限检查，采用薄膜过滤法，参照5.3.1和5.3.2执行即可。 6. 记录

《纯化水微限检查记录》（QB-QR/10-014-00） 《擦拭法微限检查记录》（QB-QR/10-015-00）

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医疗技术有限公司

纯化水微限检查记录

记录编号：QB-QR/10-014-00 取 样 点： 取样日期： 检验日期： 检验依据： 1. 操作过程 取本品10ml（实际： ml），采用薄膜过滤法测定。 2. 培养基及培养箱信息 需氧菌计数（培养基：R2A琼脂培养基；设定温度：32 ℃；培养时间：120h） 培养基批号： 培养箱编号： 3. 培养过程及结果观察： 批 号： 取 样 量： 报告日期： 培养时间（h） 温度计温度（℃） 屏显温度（℃） 温度差（℃） 供试品（cfu/ml） 阴性对照（cfu/ml） 标准规定 报告总数（cfu/ml） 结果判断 24 48 72 96 120 结果报告 需氧菌总数不得超过100cfu/ml 细菌总数+霉菌和酵母菌总数： □符合规定 □不符合规定 检验人/日期： 复核人/日期：

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